(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210044975.9 (22)申请日 2022.01.14 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 李守军　李琪　贾坤　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 代理人 段卉 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于检测牛流行热和牛流行热病毒的引物 和探针及其应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测牛流行热和牛流行 热病毒的引物和探针及其应用， 引物核苷酸序列 如SEQ ID NO： 8和SEQ  ID NO： 9所示， 所述探针的 核苷酸序列如SEQID  NO： 1所示。 本发明利用ERA 技术结合所述引物和探针建立了针对牛流行热 病毒进行检测方法和检测试剂盒。 扩增阶段搭配 使用荧光恒温扩增仪， 42℃恒温条件15分钟即可 实现对目的片段的有效扩增， 具有时间短、 灵敏 性高、 特异性强和重复性好， 成本低等优点， 最低 检测限为1.0 ×102copies/μL， 可应用于基层实 验室环境下短时间高精度的BE FV的临床检测， 具 有很好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 114410841 A 2022.04.29 CN 114410841 A 1.用于检测牛流行热和/或牛流行热病 毒的引物， 其特征在于， 所述引物核苷酸序列如 SEQ ID NO： 8和SEQ  ID NO： 9所示。 2.用于检测牛流行热和/或牛流行热病 毒的探针， 其特征在于， 所述探针的核苷酸序列 如SEQ ID NO： 1所示。 3.一种用于检测牛流行热和/或牛流行热病 毒的引物探针组合物， 其特征在于， 包含权 利要求1所述的引物和/或权利要求2所述的探针。 4.权利要求1所述的引物和/或权利要求2所述的探针在制备检测牛流行热和/或牛流 行热病毒的试剂盒中的应用。 5.根据权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒为核酸扩增试剂盒。 6.一种检测牛流行热和/或牛流行热病毒的试剂盒， 其特征在于， 含有权利要求1所述 的引物和/或权利要求2所述的探针。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒为核酸扩增试剂盒。 8.根据权利要求7 所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有激活剂和/或溶解剂。 9.根据权利要求7 所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒的反应温度为38～42℃。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒的反应温度为 42℃。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114410841 A 2用于检测牛流行热和牛流行热病毒 的引物和探针及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及病毒检测技术领域， 具体地， 涉及用于检测牛流行热和牛流行热病毒 的引物和探针及其应用。 背景技术 [0002]牛流行热(bovine  ephemeral  fever， BEF)是由牛流行热病毒(bovine  ephemeral   fever virus,BEFV)病毒引起的一种发热性急性传染病。 以高热、 呼吸困难、 跛足为特征。 主 要感染动物为乳牛、 黄牛、 水牛， 偶有鹿之感染病例。 所有不同品种、 性别、 年龄之牛只均可 能感染此病， 其中以3～5岁的牛只最易感染发病。 病毒仅1种血清型， 具封套， 呈圆锥状， 易 被酒精、 乙醚灭活， 利用高温 或低pH值 也可将其杀活。 但于 ‑70℃仍长时间具感染力。 [0003]对于牛流行热目前主要的防治措施主要为接种灭活疫苗进行免疫防控及落实病 媒防治， 强化牧场环 境及卫生管理。 目前对于BEFV的诊断方法主要包括目前， 国内主要采用 微量血清中和试验方法， 由于需使用活病毒， 检测周期长， 诊断慢， 还存在病毒污染扩散的 风险。 ELISA检测技术的建立为牛流行热抗体的筛查提供了便利条件， 核酸检测技术中的普 通PCR和荧光定量PCR等技术， 具有敏感、 快速、 特异和高通量等优点， 已广泛用于多种重要 疫病病原体的检测， LUX ‑TM荧光RT ‑PCR检测方法， 具有较好的检测准确度和灵敏度， 但是荧 光定量检测需要昂贵的仪器， 且检测试剂成本较高。 [0004]因此建立快速高效、 低成本 的分子生物学诊断方法， 对牛流行热的防控具有重要 的意义。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足， 提供一种用于检测牛流行热和牛 流行热病毒的引物和探针及其应用。 [0006]本发明的第一个目的是提供用于检测牛流行 热和/或牛流行 热病毒的引物。 [0007]本发明的第二个目的是提供用于检测牛流行 热和/或牛流行 热病毒的探针。 [0008]本发明的第三个目的是提供所述的引物和/或所述的探针在制备检测牛流行热 和/或牛流行 热病毒的试剂盒中的应用。 [0009]本发明的第四个目的是提供一种检测牛流行 热和/或牛流行 热病毒的试剂盒。 [0010]为了实现上述目的， 本发明是通过以下 方案予以实现的： [0011]用于检测牛流行热和/或牛流行热病毒的引物， 所述引物核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 8和SEQ  ID NO： 9所示。 [0012]上游引物： CA AGAGGGGGAATGGTTAAAAAGAATC(SEQ ID NO： 8)； [0013]下游引物： TGC CATTTAGGGTTACATTAAGCTTT(SEQ ID NO： 9)。 [0014]用于检测 牛流行热和/或牛流行热病毒的探针， 所述探针的核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 1所示。 [0015]探针BEFV ‑G‑Probe： CCTGCTGGTGCTGTTTCTAATATAGCATGATTCCCGACATATTATGT(SEQ  说　明　书 1/7 页 3 CN 114410841 A 3