(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210042324.6 (22)申请日 2022.01.14 (71)申请人 广州朗坤生物科技有限公司 地址 510170 广东省广州市黄埔区金峰 园 路3号自编3 栋303房 (72)发明人 苏仲春　夏婷　谭芷晴　邹刚军　 卢智俊　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 代理人 林德强 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测52型和58型HPV的LAMP引物组合、 反应 体系和方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测52型和58型HPV的 LAMP引物组合、 反应体系和方法。 本发明提供的 引物组合、 反应体系和方法用于HPV 52和HPV58的 核酸检测， 采用SYBR  Green染料进行荧光PCR仪 器检测和可视化的染色显色检测， 在55℃～ 65℃ 条件下均可实现靶基因的有效扩增及检测， 不需 变温和复杂仪器； 能快速获得检测结果， 30min内 即可完成反应， 特异性为100％， 检测灵敏度为10 ～50copies/mL。 操作简单、 快速、 灵 敏， 对硬件要 求低， 成本较低， 有利于制备成试剂盒用于广泛 推广， 为HPV 52和HPV58的现场快速检测筛查提供 有效的技 术手段， 具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书5页 序列表2页 附图3页 CN 114317828 A 2022.04.12 CN 114317828 A 1.一种LAMP检测引物组， 包括HPV52的引物组和/或HPV58的引物组； 所述HPV52的引物组的核酸序列如下 所示： 外引物： F3： CACTGTACA AAGCAGTG(SEQ  ID NO.1)； B3： AATGTATGTCATA ACATCAGC(SEQ  ID NO.2)； 内引物： FIP： TATTGTGGCCCTGCGCACGT TTTTTCTATGGTAACCTCAGAATC(SEQ ID NO.3)； BIP： CACTCGTAGCACTA ACATGACT TTTTCGCCATGACGA AGGTATTCC(SEQ ID NO.4)； 环引物： LF： CTGAG GTTAAAAAGGAAAGCA(SEQ ID NO.5)； 所述HPV58的引物组的核酸序列如下 所示： 外引物： F3： GACGTGAGCAGATGT TTG(SEQ ID NO.6)； B3： CATTGTTATGACCTTGTG(SEQ ID NO.7)； 内引物： FIP： GATA ACTGCAGTAT TACCGGACCTTTTTAGGGCTGGAAAACTTG(SEQ ID NO.8)； BIP： CCAACTCCTAGTGGCTCTATAGT TTTCGCTGTAGC CAATAAG(SEQ ID NO.9)； 环引物： LF： CTCAGA ATCACAATTATTTAATAAGC(SEQ ID NO.10)。 2.根据权利要求1所述的引物组， 其特征在于， 所述HPV52的引物组和HPV58的引物组中 外引物、 内引物、 环引物的摩尔比为(1～ 2)： (1～2)： 1。 3.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1或2所述的LAMP检测引物组。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包含Buffer、 DNA聚合酶、 指示剂。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述Buffer包含： 100～600mM  Tris‑ ClpH8.6～9.0、 60～120mM  KCl、 70～90mM  MgSO4、 90～110mM(NH4)2SO4、 0.9～1.1％Tween   20、 7～9M甜菜碱、 12 ～52mM dNTPs。 6.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述DNA聚合酶为Bst  DNA聚合酶； 优选 地， 所述DNA聚合酶的浓度为0.1 ‑0.6U/ μl。 7.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述指示剂为荧光染料； 所述荧光染料 优选为SYBR  Green。 8.权利要求1～2任一项所述引物组或权利要求3～7任一项所述试剂盒在(I)或(II)中 的应用： (I)非诊断目的地检测HPV52和/或HPV58； (II)制备检测HPV52和/或HPV58的产品。 9.一种检测HPV52和/或HPV58的方法， 包 含以下步骤： S1： 提取待测样品的DNA； S2： 使用权利要求1～2任一项所述引物 组或权利要求3～7任一项所述的试剂盒扩增 样 品DNA；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114317828 A 2S3： 根据指示剂的指示情况判断结果； 该方法不用于疾病的诊断。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述扩增条件为： 55℃～65℃反应10～ 30min。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114317828 A 3