(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210045654.0 (22)申请日 2022.01.16 (71)申请人 润安医学 科技 （苏州） 有限公司 地址 215163 江苏省苏州市高新区锦峰路8 号15号楼 208室 (72)发明人 陈舌　张思　张宇清　宣涛　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明涉及分子生物学技术领域， 具体公开 了snoRNA  SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂 类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的应用。 铂 类药物是治疗肺癌和膀胱癌患者的常用化疗药 物， 但患者血浆中snoRNA  SNORD33的表达量不 同， 导致患者对铂类药物的疗效也不同， 因此通 过检测血浆中snoRNA  SNORD33的表 达量差异， 能 用于评估肺癌或膀胱癌患者的铂类药物疗效。 本 发明还提供了一种能检测snoRNA  SNORD33表达 量的试剂盒， 包含逆转录反应体系和荧光定量 PCR反应体系。 所述试剂盒检测快速 方便、 准确率 高， 可以实现肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评 估。 使用本发 明可以协助医生对肺癌或膀胱癌患 者的铂类药物疗效进行评估和判断， 对医生选择 合适的治疗方案提供有价值的决策依据和参考 信息， 有助于提高肺癌或膀胱癌患者的治疗效果 及生存质量， 具有非常重要的临床价 值。 权利要求书1页 说明书10页 序列表1页 附图3页 CN 114317758 A 2022.04.12 CN 114317758 A 1.snoRNA  SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的 应用。 2.一种用于检测血浆snoRNA  SNORD33表达量的试剂盒， 其特征在于， 含有一组由SEQ   ID NO.1～2所示的核苷酸序列组成的引物对， 用于特异性扩增样本中的snoRNA  SNORD33， 还含有一组由S EQ ID NO.3～4所示的核苷 酸序列组成的引物对， 用于特异性扩增样 本中的 内参U6基因。 3.如权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还有逆转录反应液、 荧光定 量PCR反应液、 阳性质控品、 阴性质控品、 无核酸酶水。 4.如权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述逆转录反应液含有RNA逆转录酶、 随机 引物、 5×缓冲液、 DT T、 dNTPs、 RNA酶抑制剂。 5.如权利 要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述荧光定量PCR反应液含有高保真DNA聚 合酶、 SYBR  GREEN染料、 KCl、 MgCl2、 Tris ‑HCl、 dNTPs。 6.如权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性质控品为含有snoRNA  SNORD33和 内参U6的总RNA样本， 所述阴性质控品为无核酸酶水。 7.如权利要求2所述的试剂盒在评估肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效中的应用， 其特 征在于， 使用方法包括如下步骤： (1) 待测样本中提取 纯化RNA， 对提取的RNA进行浓度和纯度检测； (2) 以步骤(1)  提取的RNA为模板， 通过逆转录生成相应的cDNA， 纯化cDNA； (3) 以步骤(2)  所述cDNA为模板， 用SEQ  ID NO.1～2所示的核苷酸序列为引物， 进行 snoRNA SNORD33荧光定量PCR扩增； 用SEQ  ID NO.3～4所示的核苷酸序列为引物， 进行内参 U6基因荧 光定量PCR扩增； (4) 在荧光定量PCR仪中分别读取Ct值结果； (5) 检测结果判定 。 8.如权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 检测结果判定包括如下步骤： (1)判断检测体系是否合格， 阳性质控品snoRNA  SNORD33检测Ct值≤32， 且内参U6基因 检测Ct值≤28， 阴性质控品sn oRNA SNORD33和内参U6基因均未检出， 判定检测体系合格； (2) 判断样本是否合格， 样本内参U6基因检测Ct值≤ 30， 判定样本合格； (3) 如ΔCt= Ct snoRNA SNORD33  ‑ Ct U6 > 临界值， 则该样本判断为snoRNA   SNORD33表达量低， 临床提示该患者对铂类药物疗 效不佳； 如ΔCt=  Ct snoRNA SNORD33  ‑   CtU6 ≤临界值， 则该样 本判断为snoRNA  SNORD33表达量高， 临床提示该患者对铂类药物疗 效良好。 9.如权利要求8所述的临界值， 其特征在于， 肺癌患者的临界值为3.67， 膀胱癌患者的 临界值为4.07。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317758 A 2一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效 评估试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物 学技术领域， 具体涉及snoRNA  SNORD33在制备肺癌或膀胱癌 患者铂类药物疗效评估试剂盒和/或制剂中的应用和一种肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效 评估试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]铂类是经典的DNA损伤 药物， 铂类药物如顺铂或卡铂进入肿瘤细胞后， 形成Pt ‑DNA 加和物， 使肿瘤细胞内部DNA和DNA之间形成交联， 导致DNA结构破坏， DNA 复制障碍， 从而抑 制DNA的复制和转录， 诱导细胞死亡。 目前， 针对肺癌和膀胱癌患者标准的一线化疗方案仍 是以铂类药物为主的方案。 然而， 在相同的治疗方案与给药剂量的情况下， 患者的铂类药物 疗效却差异巨大， 从而严重影响患者的治疗效果、 预后及生存质量。 [0003]目前， 临床上尚未有性能良好的用于评估肺癌和膀胱癌患者铂类药物疗效的标志 物及方法。 因此， 寻找能够评估肺癌和膀胱癌患者铂类药物疗效的分子标记物， 对于提高用 药的针对性， 减少无效用药和不良反应， 选择更适合患者的治疗方案， 进而提高生存率具有 重要的意 义。 [0004]小核仁RNA （snoRNA） 属于短链非编码RNA （ncRNA） ， 广泛存在于真核生物核仁内， 大 小在60‑300个核苷酸左右， 参与核糖体RNA （rRNA） 的修饰成熟。 越来越多的研究显示， 肿瘤 组织、 细胞及体液中存在着snoRNA的异常表达， 参与肿瘤的生物学行为调控。 研究表明， snoRNA SNORD33在不同的肺癌和膀胱癌患者的血浆中存在明显的表达差异， 而这种表达差 异与肺癌和膀胱癌患者对铂类药物的疗效有密切的关联， 可以通过检测血浆中snoRNA   SNORD33的表达差异， 来评估肺癌和膀胱癌 患者对铂类药物的疗效。 发明内容 [0005]本发明公开了snoRNA  SNORD33在制备肺癌或膀胱癌患者铂类药物疗效评估试剂 盒和/或制剂中的应用， 同时公开了一种能检测血浆snoRNA  SNORD33表达量的试剂盒， 包含 逆转录反应体系和荧光定量PCR反应体系， 通过检测肺癌或膀胱癌患者血浆中snoRNA   SNORD33的表达量差异， 来评估肺癌或膀胱癌 患者的铂类药物疗效。 [0006]具体的， 本发明涉及以下技 术方案： 首先， 本发明公开了一种用于检测血浆snoRNA  SNORD33表达量的试剂盒， 含有一 组由SEQ ID NO.1～2所示的核苷酸序列组成的引物对， 用于特异性扩增样本中的snoRNA   SNORD33。 [0007]具体的， 一组检测snoRNA  SNORD33引物对， 包括qRT ‑PCR正向引物、 反向引物， 核苷 酸序列分别如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示： SNORD33‑F （SEQ ID NO.1） ： GC CGGTGATGAGA ACTTCT； SNORD33‑R （SEQ ID NO.2） ： CTCAGATG GTAGTGCATGT。 [0008]优选的， 所述核苷酸序列SEQ  ID NO.1～2所示的特异性引物浓度为10 μM 。说　明　书 1/10 页 3 CN 114317758 A 3