(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210046187.3 (22)申请日 2022.01.17 (71)申请人 济凡生物科技 （北京） 有限公司 地址 102299 北京市昌平区科技园区双营 西路79号院3 3号楼4层402室 (72)发明人 牟新涛　刘铭　韩典霖　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 白艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于 Ⅰ亚群禽腺病毒的荧光定量PCR检 测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于 Ⅰ亚群禽腺病毒的荧 光定量PCR检测试剂盒。 本发明提供了的成套引 物和探针， 其由引物1、 引物2和探针组成； 所述引 物1的核苷酸序列为序列表中序列1； 所述引物2 的核苷酸序列为序列表中序列2； 所述探针的核 苷酸序列为序列表中序列3。 本发明提供了引物 探针组及其试剂盒， 该试剂盒可 以用于Ⅰ亚群禽 腺病毒的通用检测， 其中包括检测 Ⅰ亚群中的A、 B、 C、 D、 E共5 个种， 1‑8a、 8b‑11合计12个血清型。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图3页 CN 114058741 A 2022.02.18 CN 114058741 A 1.成套引物和探针， 其由引物1、 引物 2和探针组成； 所述引物1的核苷酸序列为序列表中序列1； 所述引物 2的核苷酸序列为序列表中序列2； 所述探针的核苷酸序列为序列表中序列3 。 2.根据权利要求1所述的成套引物和探针， 其特 征在于： 所述探针的两端分别标记有荧 光基团和淬灭基团； 或所述引物1、 所述引物 2和所述探针的配比为1 ‑18： 1‑18： 1‑5。 3.一种PCR试剂， 其特 征在于： 所述PCR试剂包括权利要求1或2中的成套引物和探针。 4.根据权利 要求3所述的PCR试剂， 其特征在于： 所述引物1、 所述引物2和所述探针在所 述PCR试剂中的浓度分别为5 0‑900nM、 50‑900nM和50‑250nM。 5.一种试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括权利要求1或2所述成套引物和探针或权 利要求3或4所述的PCR试剂。 6.权利要求1或2所述成套引物和探针或权利要求3或4所述的PCR试剂在如下1） ‑3） 中 至少一种或者具有如下1） ‑3） 中至少一种功能的试剂盒中的应用， 1） 鉴定或辅助鉴定 Ⅰ亚群禽腺病毒； 2） 检测或辅助检测待测病毒是否为 Ⅰ亚群禽腺病毒； 3） 检测或辅助检测待测样本是否含有 Ⅰ亚群禽腺病毒或 Ⅰ亚群禽腺病毒 核酸。 7.权利要求5所述的试剂盒在如 下1）‑3） 中至少一种或者具有如 下1）‑3） 中至少一种功 能的产品中的应用， 1） 鉴定或辅助鉴定 Ⅰ亚群禽腺病毒； 2） 检测或辅助检测待测病毒是否为 Ⅰ亚群禽腺病毒； 3） 检测或辅助检测待测样本是否含有 Ⅰ亚群禽腺病毒或 Ⅰ亚群禽腺病毒 核酸。 8.根据权利要求6或7所述的应用， 其特征在于： 所述待测 样本为离体全血、 血清、 血浆、 肝脏、 心脏、 肾脏或泄殖腔拭子 。 9.一种检测或辅助检测待测病 毒是否为 Ⅰ亚群禽腺病 毒的方法， 包括如下步骤： 用权利 要求3或4所述PCR试剂对待测病毒进行荧光定量PCR， 检测 扩增产物， 若所述扩增产物的Ct 值≤38.5且扩增产物呈S曲线， 则所述待测病毒为或候选为 Ⅰ亚群禽腺病毒， 若所述扩增产 物的Ct值>38.5或扩增产物不呈S曲线， 则所述待测病毒不 为或候选不 为Ⅰ亚群禽腺病毒。 10.一种检测或辅助检测待测样本是否含有 Ⅰ亚群禽腺病毒的方法， 包括如下步骤： 用 权利要求3或4所述PCR试剂对待测样本进行荧光定量PCR， 检测扩增产物， 若所述扩增产物 的Ct值≤38.5且扩增产物呈S曲线， 则 所述待测样本中含有或候选含有 Ⅰ亚群禽腺病毒， 若 所述扩增产物的Ct 值>38.5或扩增产物 不呈S曲线， 则所述待测样 本中不含有或候选不含有 Ⅰ亚群禽腺病毒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114058741 A 2一种用于 Ⅰ亚群禽腺病毒 的荧光定量PCR检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于兽医领域， 具体属于动 物疾病诊断和病原检测， 涉及一种用于 Ⅰ亚群禽 腺病毒的荧 光定量PCR检测试剂盒。 背景技术 [0002]禽腺病毒(Fowl  adenovirus， FAdV)是禽类常见的传染性病原， 在世界范围内的 鸡、 鸭、 鹅中感染普遍。 大部分Fadv是禽体内的条件性病原体， 在健康动物体内复制而不致 病或只引起轻微的临床症状。 但当动物受到应激或与其他免疫抑制性疾病共同发生时， 腺 病毒致病性会显著增强。 禽腺病毒属于腺病毒科（Adenoviridae）、 禽腺病毒属 （Aviadenovirus） ， 根据其群特异性抗原不同可分为3个群， 即： FAdV ‑Ⅰ、 FAdV‑Ⅱ和FAdV‑Ⅲ。 其中Ⅰ亚群FAdV(FAdV ‑Ⅰ)是从鸡、 鹅和鸭的呼吸道感染分离得到的， 有5个种共12个血清型， 即FAdV‑1～FAdV ‑8a、 FAdV ‑8b～FAdV ‑11。 临床上主要表现为心包积液综合征 （hydropericardium  syndrome， HPS） 、 包涵体肝炎 （inclusion  body hepatitis， IBH） 、 肌胃 糜烂 （gizzard  erosions，  GE） 和产蛋下降等症状， 该病毒既可水平传播， 又可垂直传播。 2015年以来， 我国的山东、 河南、 江苏、 安徽和湖南等多个省份暴 发了FAdV ‑Ⅰ病原感染， 该病 主要侵害3～5周龄肉鸡和蛋雏鸡， 感染率高达90%  以上， 死亡率20%～80%， 对养殖业造成巨 大损失。 目前， 该病主要根据 临床表现和病理剖检可做出初步诊断， 应用病毒分离测序、 病 理组织学观察、 琼脂扩散试验、 酶联免疫吸附试验 （ELISA） ， 聚合酶链式反应 （PCR） 、 实时荧 光定量作出确诊， 但现有的检测方法存在一定的局限性及非特异性。 [0003]目前我国的Fadv ‑Ⅰ亚群主要流行毒株为4型、 8a型、 8b型、 10型和11型， 各血清 型常 呈交叉感染。 发明内容 [0004]本发明一个目的是提供一种用于 Ⅰ亚群禽腺病毒的荧 光定量PCR检测试剂盒。 [0005]本发明提供的成套引物和探针， 其由引物1、 引物 2和探针组成； 所述引物1的核苷酸序列为序列表中序列1； 所述引物 2的核苷酸序列为序列表中序列2； 所述探针的核苷酸序列为序列表中序列3 。 [0006]上述成套引 物和探针中， 所述探针 的两端分别标记有荧光基团和淬灭基团， 在本 发明的实施例中， 探针的两端分别标记荧 光基团FAM和淬灭基团BHQ ‑1。 [0007]上述成套引物和探针中， 所述引物1、 所述引物2和所述探针的配比为1 ‑18： 1‑18： 1‑5。 [0008]本发明另一个目的是提供一种PCR试剂。 [0009]本发明提供的PCR试剂， 其包括上述成套引物和探针。 [0010]上述PCR试剂中， 所述引物1、 所述引物2和所述探针在所述PCR试剂中的浓度分别 为50‑900nM、 50‑900nM和50‑250nM。说　明　书 1/6 页 3 CN 114058741 A 3