(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210050754.2 (22)申请日 2022.01.17 (71)申请人 陕西省动物研究所 地址 710032 陕西省西安市碑林区兴庆路 88号 (72)发明人 邓捷　姜维　张红星　王启军　 赵虎　孔飞　张晗　马红英　 (74)专利代理 机构 焦作加贝专利代理事务所 (普通合伙) 41182 代理人 任昕 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/53(2006.01) C12N 9/02(2006.01) (54)发明名称 基于TYRP1基因的分子标记在大鲵体色选育 中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于 TYRP1基因的分子标 记在大鲵体色选育中的应用， 首次克隆大鲵 TYRP1基因编码区核苷酸序列， 全长1584bp， 编码 527个氨基酸残基， 包括一个酪氨酸酶 （177 ‑411 氨基酸） 功能结构域； 采用实时荧光定量PCR技术 检测TYRP1基因在野生型大鲵体色不同组织及不 同体色皮肤组织中的表达谱差异； 对比不同体色 TYRP1基因CDS区全序列， 发现黄色体色个体的 TYRP1基因存在 2个核苷酸插入位点， 导致译码框 发生变化， 氨基酸序列中断。 本发明为大鲵体色 的定向选育提供了有效的分子标记， 为体色多样 性形成的分子遗传基础及细胞代谢机制研究提 供方法， 有助于大鲵新品系选育， 解决大鲵种质 退化问题。 权利要求书1页 说明书11页 序列表4页 附图8页 CN 114150075 A 2022.03.08 CN 114150075 A 1.一种基于 TYRP1基因的分子标记在大鲵 体色选育中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述 TYRP1基因的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1所示。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述 TYRP1基因编码的蛋白质序列如SEQ   ID NO.2所示。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述 TYRP1基因克隆引物的上下游序列分 别如SEQ ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示。 5.TYRP1基因采用实时荧光定量PCR （qRT ‑PCR） 技术在野生型大鲵不同组织 中表达的应 用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于： 所述不同组织包括肌肉、 皮肤、 心脏、 肝脏、 脾、 肺、 胃、 胰脏、 生殖腺和肠道。 7.TYRP1基因采用实时荧 光定量PCR技 术在大鲵不同体色 皮肤组织中的表达应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于： 所述大鲵不同体色皮肤包括黄色皮肤、 黄 底镶嵌黑色 皮肤、 黑底镶嵌黄色 皮肤及灰色 皮肤或虎斑色 皮肤。 9.根据权利要求5或7所述的应用， 其特征在于： 所述 TYRP1基因实时荧光定量PCR引物 的上下游序列分别如SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114150075 A 2基于TYRP1基因的分子标记在大鲵体色选育中的应用 技术领域 [0001]本发明属于分子育种技术领域， 具体涉及一种基于TYRP1基因的分子标记在大鲵 体色选育中的应用。 背景技术 [0002]物种丰富多样的体色特征一直是生物进化和表观遗传学研究的热点问题。 研究认 为， 动物体色通常是 由其体表皮肤含有不同的色素细胞及其不同的数量分布所致。 不同于 哺乳动物仅含有一种黑色素细胞， 两栖动物体色与其真皮层中的三类色素细胞相关。 针对 两栖类动物具有的独特体色类型， 以往研究主要从生理学和行为学上对其体色形成模式进 行阐述和分析， 但有关其体色性状下潜在的分子遗传特征的报道较少。 近十年来， 随着分子 标记技术的发展， 利用分子生物学方法针对不同体色性状进行标记从而进行选育辅助选 择， 能够有效提升 育种效率。 [0003]大鲵(Andrias  davidianus)作为我国特有的珍稀物种， 具有重要的研究和应用价 值。 在漫长的进化及人工驯养过程中， 大鲵形成了多种不同的体 色表型， 使其成为研究两栖 动物体色多态性和分子遗传机制的优良材料。 然而目前关于大鲵体色的研究十分有限， 在 染色体组操作技术、 选择育种、 功能基因等方面尚属空 白。 同时， 大鲵种群存在一定的种质 退化问题， 缺少高性能的养殖新品种或新品系。 考虑到大鲵具有重要的理论研究和社会经 济价值， 利用分子标记技 术培育大鲵不同体色新品种或新品系已势在 必行。 [0004]酪氨酸酶相关蛋白 ‑1(TYRP1)基因编码的活性蛋白为5,6二羟基吲哚2 ‑羧酸氧化 酶， 是一种在人的着色性黑色素细胞和黑色素瘤的黑素体中表达的一种丰富的细胞内糖蛋 白， 其不仅能催化底物反应， 还 可作为酪氨酸 酶的分子伴侣而稳定其活性， 是黑色素合 成下 游途径中的关键基因。 研究表明， TYRP1基因的突变或酶的失活， 会影响黑色素小体的成熟 和黑色素细胞的增殖与凋亡， 最终导致机体组织异常表达， 使狗、 马、 小鼠及人类表现出肤 色或发色变浅、 出现色斑及条纹等异化特征(Miller， 1997； Rieder， 2001； Biossy， 2003； Cargjll， 2005)。 然而针对大鲵这 一稀有物种， TYRP1基因相关的分子 遗传学研究较少。 发明内容 [0005]针对现有技术中的不足， 本发明的目的是提供一种基于TYRP1基因的分子标记在 大鲵体色选育中的应用。 [0006]为达到上述目的， 本发明的解决方案是： [0007]一种基于TYRP1基因的分子标记在大鲵 体色选育中的应用。 [0008]进一步地， TYRP1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 [0009]进一步地， TYRP1基因编码的蛋白质序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0010]进一步地， TYRP1基因克隆引物的上下游序列分别如SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4 所示。 [0011]TYRP1基因采用实时荧 光定量PCR技 术在野生型 大鲵不同组织中表达的应用。说　明　书 1/11 页 3 CN 114150075 A 3