(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210068249.0 (22)申请日 2022.01.20 (71)申请人 中山大学附属第一医院 地址 510080 广东省广州市中山 二路58号 (72)发明人 陈柏龄　赵胜利　莫小毅　温振兴　 祁志超　 (74)专利代理 机构 广州海心联合专利代理事务 所(普通合伙) 44295 专利代理师 马赟斋 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 hsa-miR-144-5p作为绝经后骨质疏松诊断 标志物的应用 (57)摘要 本发明公开了hsa ‑miR‑144‑5p作为绝经后 骨质疏松诊断标志物的应用。 本发 明采用高通量 基因芯片技术对PMOP患者血清miRNA表达谱进行 检测， 并与绝经后非骨质疏松人群进行对比， 筛 选两者之间差异表达miRNA， 通过实时荧光定量 PCR技术进一步验证所选miRNA在PMOP患者和n ‑ PMOP之间的差异水平， 确认所筛选 标志物的临床 应用价值， 最终为临床PMOP的诊断提供简便易 行、 高精确度的生物标志 物。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图3页 CN 114807341 A 2022.07.29 CN 114807341 A 1.hsa‑miR‑144‑5p作为绝经后骨质疏松诊断标志 物的应用。 2.特异性检测hsa ‑miR‑144‑5p的产品在制备诊断绝经后骨质疏松的工具中的应用。 3.根据权利 要求2所述的特异性检测hsa ‑miR‑144‑5p的产品在制备诊断绝经后骨质疏 松的工具中的应用， 其特征是， 所述产品包括实时荧光定量PCR检测hsa ‑miR‑144‑5p表达水 平的制剂。 4.根据权利 要求3所述的特异性检测hsa ‑miR‑144‑5p的产品在制备诊断绝经后骨质疏 松的工具中的应用， 其特征是， 所述制剂包括特异性扩增hsa ‑miR‑144‑5p的引物以及包含 所述引物的诊断试剂盒。 5.根据权利 要求4所述的特异性检测hsa ‑miR‑144‑5p的产品在制备诊断绝经后骨质疏 松的工具中的应用， 其特 征是， 所述特异性扩增hsa ‑miR‑144‑5p的引物如下： GSP:5’GGGGGGGGATATCATCATATAC 3’； R:5’GTGCGTGTCGTG GAGTCG3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807341 A 2hsa‑miR‑144‑5p作为绝经后骨质疏 松诊断标志物的应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子诊断， 涉及血清微小RNA的新应用， 特别涉及hs a‑miR‑144‑5p作为 绝经后骨质疏松诊断标志 物的应用。 背景技术 [0002]绝经后骨质疏松(Postmenopausal  Osteoporosis， PMOP)是一种以骨质流失和骨 微结 构破坏为特征的代谢性疾病， 临床主要表现为骨折风险的增加。 随着 医疗费用、 残疾 率和 死亡率的增加， 临床和公共卫生系统将面临巨大的压力和前所未有的挑战。 因此， 及 时诊 断PMOP并尽早采取干预措施， 有助于将PMOP对绝经后妇女骨健康的危害降至最低。 [0003]双能X线骨密度测定法(Du al‑energy X‑rays Absorptiometry， DXA)是一种国际 通用的临床骨量评价方法。 然而， 根据国际骨质疏松基金会(International  Osteoporosis   Found ation， IOF)2013年亚太审计报告指出， 中国每100万人拥有不到1台DXA设备。 有条件 接受DXA检查的绝经后女性人数不足总人数的1/5。 便携式定量超声、 高分辨率CT等手段可 作为DXA检查的替代方法， 但受低测量精确度或经济条件、 场地所限， 在我国普及率远不及 DXA。 [0004]作为可以直接反映成骨细胞和破骨细胞活动水平的指标， 血清骨转换标志物 (Bone T urnover Makers， BTMs)如 25‑羟基维生素D[2 5‑hydroxy Vitamin D， 25(OH)D]、 骨 钙素/ N端中分子片段(N ‑terminal  Middle Segment Osteocalcin， N ‑MID)、Ⅰ型前胶原N端 前肽(Propeptide  of Type I Procollagen， P1NP)和β胶联降解产物(β ‑C‑terminal   Telopept  ide of Type I Collagen， β ‑CTX)等常用于PMOP的辅助诊断和治疗 监测。 因BTMs 来源于循环血清， 取材方便， 在临床中可通过成熟方法简 便测得， 大量学者集中于其与骨密 度(Bone Mineral Density， BMD)之间关系的研究， 试图以此来反映BMD的变化。 然而， 人们 已经认识到， B TMs在反映PM OP方面存在固有局限性， 表现为灵敏度和特异度均比较低。 有文 献报道， BTMs的血清水平与骨组织形态计量学评估的骨形成和骨吸收的结果相关性较差 (相关系数大多在0.21～0.36之间)。 而且， BTMs水平在一些非PMOP的代谢性骨病中也会升 高。 综上， 现有针对PM OP检测程序繁琐、 不易 获得、 方法单一、 灵敏度和特异度低等问题成为 制约PMOP早期及时诊断的重要因素。 因此， 临床上亟需寻找一种简便的、 易获得的、 兼顾高 灵敏度和特异度的新型生物标志 物。 [0005]血清微小RNA(miRNA/microRNA)是一种长度介于18 –24个核苷酸的非编码单链短   RNA。 作为基因表达的表观遗传学调控机制之一， 其通过与目标信使RNA(Messenger  R NA， mRNA)3’非翻译区(3' ‑Untranslated  Region， 3 ’UTR)结合形成RNA诱导沉默复合体(RNA   Inducing  Silence Complex， RISC)， 促使mRNA降解或抑制其转录后翻译， 进而参与细胞增 殖、 分化及凋亡的调节。 miRNA作为疾病 早期诊断、 治疗和预后监测生物标志物的潜能已经 在诸如肿瘤、 心血管疾病、 肥胖及糖尿病等疾病中得到了较好的验证。 尽管有少量研究发现 某些miRNA表达水平在骨质疏松 诱导的细胞和 动物模型中存在差异， 由于研究对象不同、 样 本来源及 处理过程差异、 以及实验条件的非标准化， 不同研究所筛选出的miRNA差异较大，说　明　书 1/10 页 3 CN 114807341 A 3