(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210066762.6 (22)申请日 2022.01.20 (71)申请人 湖北省农业科 学院畜牧兽医研究所 地址 430064 湖北省武汉市洪山区狮子山 街南湖瑶苑4号 (72)发明人 彭先文　乔木　武华玉　吴俊静　 梅书棋　周佳伟　张宇　徐忠　 李梓芃　宋忠旭　孙华　李良华　 赵海忠　董斌科　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 代理人 许佳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与猪肌肉pH值和瘦肉率相关的分子标 记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与猪肌肉pH值和瘦肉率 性状相关的分子标记及其应用， 属于猪遗传标记 制备技术领域。 SNP分子标记的核苷酸如SEQ  ID  NO:1所示， 是从猪NT5C1A基因3 ′UTR克隆得到的 一段特异的核苷酸片段， 在SEQ  ID NO:1的479bp 处存在一个T/C碱基突变。 本发明提供了用于检 测该位点的引物对， 并建立了相应的检测方法， 为猪肉质性状标记辅助选择提供了新的分子标 记。 本发明可实现对猪肌肉pH值和瘦肉率相关性 状进行早期选 择， 且检测方法高效、 准确， 从而能 加速猪肉质改良的进程， 提高猪育种的经济效 益。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114350821 A 2022.04.15 CN 114350821 A 1.一种与猪肌肉pH值和瘦肉率相关的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.1所示， SEQ  ID NO.1所示序列的第479bp处存在一处T/ C突变。 2.如权利 要求1所述的分子标记， 其特征在于， 所述突变包括CC、 CT和TT三种突变类型， 其中， 当猪个体基因型为TT型时， 所述猪个体的瘦肉率和肌肉pH值均高于CC型和TC型的猪 个体。 3.一种扩增权利要求1所述的分子标记的引物对， 其特征在于， 所述引物对为如SEQ  ID  NO： 2所示的上游引物和如SEQ  ID NO： 3所示的下游引物。 4.一种鉴别猪肌肉pH值和瘦肉率性状的试剂 盒， 其特征在在于， 包括权利要求3所述的 引物对。 5.一种鉴别猪肌肉pH值和瘦肉率 性状的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 以待测猪个体的DNA为模板， 利用权利要求3所述的引物对进行扩增， 获取扩增产物； 对 所述扩增产物进行测序， 分析基因型以及所述基因型与瘦肉率和肌肉pH值性状的相关性， 进而判断待测猪 个体的pH值和瘦肉率。 6.如权利要求5所述的鉴别猪肌肉pH值和瘦肉率性状的方法， 其特征在于， 扩增体系 包 括如下组分： DNA  100ng、 PCR  mix 25 μL、 上游引物和下游引物 各1 μL、 加ddH2O补至总体积50 μL。 7.如权利要求5所述的鉴别猪肉质性状的方法， 其特征在于， 扩增程序为： 94℃预变性 3min； 94℃变性3 0s， 60℃退火3 5s， 72℃延伸3 5s， 35个循环； 72℃延伸10mi n； 4℃保存。 8.如权利要求1所述的分子标记或权利要求3所述的引物对或权利要求4所述的试剂 盒 或权利要求5所述的方法在辅助对猪育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350821 A 2一种与猪肌肉p H值和瘦肉率相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子标记领域， 特别是涉及一种与猪肌肉pH值和瘦肉率相关的分子标 记及其应用。 背景技术 [0002]猪肉品质是猪的重要经济性状， 提高猪肉品质是现代种猪选育工作的重要目标之 一， 同时也是满足消费者对猪肉风味、 食品健康和营养需求的重要保障。 [0003]肌肉pH值是肉质性状的重要评价指标之一， 屠宰后肌肉最终的pH值是衡量猪肌肉 品质的重要指标， 肌肉的pH值过高则容易形成DFD肉(黑干肉)， 如果肌肉的pH值过低则容易 形成PSE肉(白肌肉)， 这两种情况都对猪肉的品质造成了巨大的影响， 并且对猪肉的深加工 带来了较大影响。 瘦肉率是影响猪肉品质和经济效益的重要性状。 然而pH值和瘦肉率的测 定只能在屠宰之后， 极大的限制了选育工作的发展。 分子标记辅助选择(Marker ‑assisted   selection,MAS)的出现大大加速了猪育种的进程， 它是利用与特定性状相关联的分子标记 作为辅助手段进行选择育种， 具有快速、 准确、 不受环境影响等优点， 不仅能大大减少育种 的人力物力消耗， 而且能缩短育种时限。 [0004]用于MAS的分子标记包括蛋白质标记， 微卫星标记， 单核苷酸多态性(single   nucleotide  polymorphi sm， 简称SNP)标记等。 SNP标记指由基因组单核苷酸变异引起的DNA 序列多态性， 包括碱基转换、 颠换、 缺失或插入等。 挖掘猪肉质性状相关的SNP， 能有效加快 猪肉质性状的改良进 展， 为养猪业的可持续发展将带来巨大的经济效益。 [0005]胞质5′核苷酸酶1A(cytosolic  5'‑nucleotidase  1A,NT5C1A)基因， 在人的骨骼 肌和小鼠的胫骨前肌表达量较高(Hunsucker  et al.,2001； Sala ‑Newby et al,1999)； 抗 NT5C1A自身抗体可以作为包涵体肌炎(一种肌肉疾病)的标记物(Amlani  et al,2019)。 迄 今为止， 尚无有关NT5 C1A基因作为猪肌肉pH值和瘦肉率分子标记的相关报道。 发明内容 [0006]本发明的目的是提供一种与猪肌肉pH值和瘦肉率相关的分子标记及其应用， 以解 决上述现有技术存在的问题， 为猪肌肉pH值和瘦肉率性状相关的的分子标记辅助育种提供 一种新的分子标记。 [0007]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0008]技术方案一： 一种与猪肌肉pH值和瘦肉率相关的分子标记， 所述分子标记的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， SEQ  ID NO.1所示序列的第479bp处存在一处T/ C突变。 [0009]优选地， 所述突变包括CC、 CT和TT三种突变类型， 其中， 当猪个体基因型为TT型时， 所述猪个体的瘦肉率和肌肉pH值均高于 CC型和TC型的猪 个体。 [0010]优选地， 所述引物对为如SEQ  ID NO： 2所示的上游引物和如SEQ  ID NO： 3所示的下 游引物。 [0011]技术方案二： 一种鉴别猪肌肉pH值和瘦肉率性状的试剂盒， 包括权利要求3所述的说　明　书 1/5 页 3 CN 114350821 A 3