(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210072713.3 (22)申请日 2022.01.21 (71)申请人 河北省农林科 学院粮油作物研究所 地址 050035 河北省石家庄市高新区恒山 街162号 (72)发明人 刘长友　田静　范保杰　曹志敏　 胡阿丽　黄冀楠　苏秋竹　王彦　 张志肖　王珅　时会影　沈颖超　 (74)专利代理 机构 北京科龙寰宇知识产权代理 有限责任公司 1 1139 专利代理师 马鑫 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的分子标记 及其在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种 与饭豆抗豆象QTL位点紧 密连锁的分子标记及其在小豆抗豆象分子标记 辅助育种中的应用。 本发明通过 “饭豆F021 ×白 红2号”杂交， 结合幼 胚拯救， 形成稳定的RIL作图 群体， 利用经筛选 出来的264个多态性标记， 构建 了一个包含11个连锁 群、 总长2 68.2cM、 密度适中 的遗传连锁图谱， 借助该遗传连图谱定位了一个 饭豆抗豆象QTL位点(LOD值大于4)， 命名为 UmBr1， 位于第2连锁群Achr7 ‑43～Achr7 ‑71标记 区间内， 标记间的遗传 距离为0.7cM， 表型变异解 释率为12.3％、 加性效应为 ‑0.165。 同时， 还筛选 得到与该QTL位点连锁的两个SSR分子标记为 Achr7‑43和Achr7 ‑71， 通过利用这2个SSR分子 标 记检测该QTL位点， 在苗期就可以进行抗豆象材 料的筛选， 能够大大提高筛选效率， 节约生产成 本， 加快育种进程。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 114525354 A 2022.05.24 CN 114525354 A 1.一种与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记， 所述饭豆抗豆象QTL位点命名 为UmBr1， 位于第2连锁群的Achr7 ‑43～Achr7 ‑71标记区间内， 对应于小豆第7号染色体， 与 UmBr1位点连锁的两个SSR分子标记为Achr7 ‑43和Achr7‑71， 所述的SSR分子标记Achr7 ‑43 为Achr7‑43F引物和A chr7‑43R引物扩增的片段， 所述的SSR分子标记A chr7‑71为Achr7‑71F 引物和Achr7 ‑71R引物扩增的片段， Achr7 ‑43F引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， Achr7‑43R引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示； Achr7 ‑71F引物的核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 3所示， Ac hr7‑71R引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 4所示。 2.如权利 要求1所述的SSR分子标记， 其特征在于， 所述的饭豆抗豆象QTL位点的遗传距 离为0.7c M， 可解释中12.3％的表型变异， 加性效应为 ‑0.165。 3.权利要求1所述的与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记在小豆抗豆象分子 标记辅助选择育种中的应用。 4.一种用于扩增与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记的引物对， 其特征在 于， 所述的SS R分子标记为Achr7 ‑43和Achr7‑71， 用于扩增SS R分子标记Achr7 ‑43的引物对 由上游引物Achr7 ‑43F和下游引物Achr7 ‑43R组成， 用于扩增SS R分子标记Achr7 ‑71的引物 对由上游引 物Achr7‑71F和下游引物Achr7 ‑71R组成； Achr7 ‑43F引物的核苷酸序列如SEQ   ID NO： 1所示， Achr7 ‑43R引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示； Achr7 ‑71F引物的核苷酸 序列如SEQ  ID NO： 3所示， Ac hr7‑71R引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 4所示。 5.权利要求 4所述的引物对在小豆抗豆象分子标记辅助选择育种中的应用。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 分别通过Achr7 ‑43F引物和Achr7 ‑43R引物 及/或Achr7 ‑71F引物和Achr7 ‑71R引物对待检测材料进行PCR扩增， 若待检测材料中能够扩 增出权利要求1所述的与饭豆抗豆 象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记的相应片段， 则待检 测材料中含有抗豆象QTL 位点。 7.如权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的扩增采用的PCR扩增反应体系为： 模板 DNA1 μl， Taq  Mix 5 μl， 上游引物 0.5 μl， 下游引物0.5 μl， ddH2O  3 μl； PCR扩增程序： 94℃预变 性4min； 94℃变性50s， 50 ‑55℃复性50s， 72℃延伸50s， 35个循环； 72℃延伸10min； 取出PCR 产物4℃保存。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114525354 A 2与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的分子标记及其在小 豆抗豆 象分子标记辅助育种中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种饭豆抗豆象QTL位点， 同时还涉及与该饭豆抗豆象QTL位点连锁的 分子标记， 以及该QTL位点及分子标记在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用。 本发 明属 于分子标记辅助育种技 术领域。 背景技术 [0002]豆象是危害小豆、 绿豆、 豇豆等食用豆类作物的主要仓储害虫。 受豆象危害后， 食 用豆表面出现孔洞， 重量降低， 营养丧 失， 质量严重下降。 目前， 生产上防治豆象危害的方法 主要为磷化铝熏蒸法。 这不仅增加了食用豆生产的成本， 而且磷化铝如果使用不当， 容易造 成环境污染、 导致人畜中毒。 防治豆象危害最为经济且环保的方法是培育抗豆象食用豆品 种。 [0003]小豆中缺少抗豆象资源。 到目前为止， 已有的报道中还未从小豆或其野生种材料 中发现抗豆象材料。 现有的小豆抗豆象研究是基于小豆的近缘野生种Vigna  nepalensis。 Somta等利用Vigna  nepalensis与小豆进行杂交， 构建遗传分离群体， 对其抗豆象基因位点 进行了定位， 然而在他们发现的抗豆 象QTL位点中， 大部分位点与籽粒大小紧密连锁， 后代 材料在表现抗豆象的同时往往籽粒较小， 这就不利于用其培育抗豆象且籽粒较大、 商品性 较好的小豆品种。 [0004]大部分饭豆资源对豆象有抗性， 且作为栽培种， 其籽粒较大， 在育种应用中可以较 少的引入不利性状。 前期， 我们已经通过幼胚拯救的手段实现了小豆与饭豆间的远缘杂交。 这就为培育抗豆象小豆种质或品种提供了条件。 在回交过程中我们发现， 若不对抗豆象表 型进行紧密追踪， 回交后代材料中很容易丢失抗豆象特性。 因此需要对抗豆象基因进行定 位， 以进行分子标记辅助选择， 实现对抗豆象表型的标记 跟踪。 [0005]本发明利用河北省农林科学院粮油作物研究所保存的抗豆象饭豆资源饭豆F021， 通过利用远缘杂交和幼胚拯救构建了遗传研究群体， 结合室内抗豆象鉴定， 利用多态性SSR 标记构建遗传连锁图谱定位饭豆抗豆象基因， 为今后小豆和饭豆抗豆象分子标记辅助育种 及抗豆象基因精细定位奠定基础。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种与抗豆象相关的QTL位点以及与该QTL位点紧密连锁 的分子标记及其在小豆抗豆象育种中的应用。 [0007]为了达到上述目的， 本发明采用的主 要技术方案包括： [0008]本发明筛 选饭豆抗豆象QTL 位点及SSR分子标记的方法如下： [0009]S1:以抗豆象饭豆F021作母本， 以感豆象亲本白红2号作父本进行杂交， 经过幼胚 拯救， 获得 F1； F1连续自交， 采用单 粒传法构建F8代RIL群体， 该RIL群体包括178个单株材 料； [0010]S2:RIL群体每个株系分别接种绿豆象成虫， 即为2个处理， 每个处理设置3次重复；说　明　书 1/6 页 3 CN 114525354 A 3