(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210074260.8 (22)申请日 2022.01.21 (71)申请人 生物岛实验室 地址 510320 广东省广州市海珠区广州国 际生物岛螺 旋三路6号 申请人 广东默迪优 谱生物科技有限公司 (72)发明人 翟志向　周晓光　宋合兴　李运涛　 (74)专利代理 机构 北京智信四方知识产权代理 有限公司 1 1519 代理人 葛啟宏 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合、 试剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明公开了多种呼吸道病毒核酸质谱检 测的引物组合、 试剂盒及检测方法， 涉及分子生 物学检测技术领域。 其中， 包括48条扩增引物和 24条质量探针延伸引物， 通过多重PCR技术与 MALDI‑TOF技术联用， 能够实现对多种呼吸道病 毒的分型鉴定。 检测通量高， 更适合于大规模的 病原体筛查。 权利要求书1页 说明书11页 序列表12页 附图5页 CN 114350857 A 2022.04.15 CN 114350857 A 1.一种用于多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合， 其特征在于， 包括48条扩增引 物和24条质量探针延伸引物， 其中， 扩增引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1‑48所示； 质量探 针延伸引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.49‑72所示。 2.权利要求1所述的引物组合在制备多种呼吸道病毒 核酸质谱检测产品中的应用。 3.一种用于多种呼吸道病 毒核酸质谱检测的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1所述 的引物组合。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括RT ‑PCR反应试剂、 去磷酸化反应 试剂及质量探针延伸反应试剂。 5.一种检测多种呼吸道病毒的方法， 其特征在于， 所述方法使用 如权利要求3或4所述 的试剂盒， 包括： (1)利用48条扩增引物对待测样本进行RT ‑PCR扩增反应； (2)对步骤(1)得到的扩增产物利用碱性磷酸酶进行去磷酸 化处理； (3)利用24条质量探针延伸引物对步骤(2)得到去磷酸 化产物进行 单碱基延伸； (4)对步骤(3)得到的延伸产物进行树脂脱盐纯化； (5)质谱检测， 确定病原体种类。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述多种呼吸道病毒为呼吸道合胞病毒A 和B、 副流感病毒1型至4型、 人偏肺病毒A和B、 人博卡病毒1型和2型、 鼻病毒、 甲流病毒通用 型、 甲流病毒H1N1、 甲流病毒H3N2、 甲流病毒H1N12009、 乙流病毒、 冠状病毒 ‑SARS、 冠状病 毒‑MERS、 新型 冠状病毒SARS ‑CoV‑2和腺病毒。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述质谱检测采用的是基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱MALDI ‑TOF MS。 8.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 所述碱性磷酸酶为虾碱性磷酸酶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350857 A 2多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合、 试剂盒及检测 方法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学检测技术领域。 更具体地， 涉及一种多种呼吸道病毒核酸 质谱检测的引物组合、 试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]能够引起人类呼吸道感染的病原体种类多样， 病毒是一个重要致病因素， 约有 80％的呼吸道感染由呼吸道病毒引起的。 这一系 列病毒种类繁多， 其中最常见， 最具有代表 性的包括： 正黏病毒科(Ort homyxoviridae)的流感病毒(influenzaviruses， IFVs)， 副黏病 毒科(Paramyx oviridae)的呼吸道合胞病毒(respiratory  syncytial  virus， RSV)， 副流感 病毒(parainfluenzaviruses， PIVs)， 人偏肺病毒(humanmetapneumovims， HMPV)， 小RNA病 毒科(Picornaviridae)的人鼻病毒(huamnrhinoviruses， HRVs)， 冠状病毒科 (Coronav iridae)的人冠状病毒(human  coronaviruses， HCoVs)， 腺病毒科(Adenov iridae) 的腺病毒(adenoviruses， ADVs)， 以及细小病毒科(Parvoviridae)的人博卡病毒(human   bocavirus， HBOVs)。 虽然呼吸道病毒的种类繁多， 但其感染有着类似的特点。 首先， 呼吸道 病毒的传染性 都很强， 非常容易在人群聚集的场所， 如学校、 医院传播。 其次， 呼吸道病毒感 染引起的症状不特异， 大多 呈现为上呼吸道感染的症状， 如 普通感冒、 咽喉炎等。 第三， 人群 对于呼吸道病原体普遍易感， 病毒变异速度快， 由疫苗 获得的免疫力并非长久有效， 呼吸道 感染容易反复发生。 尤其2019新型冠状病毒传染性强， 传播速度快， 特别 是免疫力低下者， 如老年人， 免疫抑制， 基础病患者， 有时更容易形成继发感染， 对肺部及其他器官造成重大 损伤， 发展成重症， 甚至危及生命。 [0003]对呼吸道病毒进行核酸检测， 目前的主要方法是荧光定量RT ‑PCR方法。 但是由于 荧光通道的限制， 一次只能检测1 ‑2种病毒， 而且每次的样本检测通量低， 不利于临床快速 准确大规模的进 行病例筛查； NGS高通量测序也是检测病毒的一种重要技术， 通过全测序可 以实现病毒及亚型 的准确鉴定， 但是实验操作复杂， 整体流程时间长， 样本检测成本升高。 因此对于呼吸道病原体的检测， 必须要综合 考虑检测重数与检测通 量。 发明内容 [0004]本发明的一个目的在于提供一种用于多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引物组合 及包含这些引物组合的检测试剂盒， 提高对呼吸道病毒的筛查诊断能力。 [0005]本发明的另一个目的在于提供一种利用上述试剂盒进行多种呼吸道病毒核酸质 谱检测的方法。 该 方法使得呼吸道病毒检测特异性强， 灵敏度高。 [0006]为达到上述目的， 本发明采用下述 技术方案： [0007]第一方面， 本发明提供一种用于多种呼吸道病毒核酸质谱检测的引 物组合， 包括 48条扩增引物和24条质量探针延伸引物， 其中， 扩增引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1‑48 所示， 具体见表1； 质量探针延伸引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.49‑72所示， 具体见表 2。说　明　书 1/11 页 3 CN 114350857 A 3