(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210072463.3 (22)申请日 2022.01.21 (71)申请人 苏州赛福医学检验 有限公司 地址 215100 江苏省苏州市工业园区星湖 街218号生物纳米园A4-309、 310、 311 室 (72)发明人 杨锋　余伟师　梁萌萌　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 张柳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于多重PCR及高通量测序技术检测成骨不 全症相关基因的引物组、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明涉及生物检测领域， 特别涉及基于多 重PCR及高通量测序技术检测成骨不全症相关基 因的引物组、 试剂盒及应用。 本发明提供的基于 高通量测序技术检测成骨不全基因的多重PCR特 异性引物， 检测基因范围包含IFITM5、 WNT1、 FKBP10、 CRTAP、 COL1A1和COL1A2基因全部外显子 检测； 能够同时检测多个样本、 多个成骨不全易 感基因， 有效提高检测效率、 准确率， 同时降低成 本、 简化操作步骤等。 权利要求书2页 说明书23页 附图3页 CN 114717303 A 2022.07.08 CN 114717303 A 1.引物组合， 其特 征在于， 包括但不限于： (I)、 具有如SEQ  ID No.1～SEQ ID No.316所示核苷酸序列的引物； 或 (II)、 如(I)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序 列， 且与(I)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列； 或 (III)、 与(I)或(I I)所示的核苷酸序列至少有80％同源性的核苷酸序列。 2.如权利要求1所述的引物组合， 其特征在于， 所述引物 组合包括如下组合中的一种或 两者以上： 组合X： (1)、 上游引物具有如SEQ  ID No.(2X‑1)所示的核苷酸序列； 和 (2)、 下游引物具有如SEQ  ID No.(2X)所示的核苷酸序列； 和 (3)、 如(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸 序列， 且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列； 或 (4)、 与(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有80％同源性的核苷酸序列； 其中， X选自1～158中的任意整数。 3.如权利要求1至2任一项所述的引物组合在制备扩增、 检测或筛选成骨不全症相关基 因或其突变的试剂、 试剂盒、 系统和/或装置中的应用。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述成骨不全症相关基因包括但不限于 IFITM5、 WNT1、 FKBP10、 CRTAP、 COL1A1或COL1A 2中的一种或多种。 5.如权利要求3或4所述的应用， 其特征在于， 所述扩增、 检测或筛选包括第 一步骤和第 二步骤； 所述第一 步骤的反应 体系包括： 所述第二 步骤的反应 体系包括： 。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述第一步骤的扩增程序包括： 95℃预变性 2min， 95℃变性15s， 60℃退火3min， 72℃延伸90s， 进行18个循环， 最后72℃延伸10min， 于4 ℃保存； 所述第二步骤的扩增程序包括： 98℃预变性30s， 98℃变性10s， 60℃退火30s， 72℃延伸权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114717303 A 230s， 进行12个 循环， 最后72℃延伸10mi n， 于4℃保存。 7.扩增、 检测或筛选成骨不全症相关基因或其突变的试剂、 试剂 盒、 系统和/或装置， 其 特征在于， 包括如权利要求1或2所述的引物组合， 以及可接受的辅料、 助剂、 载体、 模块或部 件。 8.如权利要求7所述的试剂、 试剂盒、 系统和/或装置， 其特征在于， 所述成骨不全症相 关基因包括但不限于IFITM 5、 WNT1、 FKBP10、 CRTAP、 COL1A1或COL1A 2中的一种或多种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114717303 A 3