(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210083292.4 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 上海康黎医学检验所有限公司 地址 201599 上海市金山区朱 泾镇中涛路 355号7幢 (72)发明人 何熲　何小明　张辉　包海波　 巩许婷　韦鑫　邱伟　 (74)专利代理 机构 上海智信专利代理有限公司 31002 代理人 余永莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于前列腺癌早期诊断、 转移预警以及 预后评估的引物探 针组合、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供一种用于前列腺癌早期诊断、 转 移预警以及预后评估的引物探针组合、 试剂盒及 其应用。 引物探针组合包括： 用于检测PCA3基因 的第一组引物对， 具有SEQ  ID NO： 1～2所示的核 苷酸序列； 用于检测PSA 基因的第二组引物对， 具 有SEQ ID NO： 4～5所示的核苷酸序列； 用于检测 TMPRSS2‑ERG融合基因的第三组引物对， 具有SEQ   ID NO： 7～8所示的核苷酸序列； 以及与上述三组 引物对相应的探针。 本发明不仅实现了前列腺癌 的早期诊断， 还实现了对确诊患者前列腺癌转移 以及恶化风险的有效评估， 适用于大规模的人群 筛选普查。 权利要求书2页 说明书7页 序列表3页 附图1页 CN 114410787 A 2022.04.29 CN 114410787 A 1.一种用于前列腺癌 早期诊断、 转移预警以及预后评估的引物探针组合， 其特征在于， 包括： 用于检测人体体内PCA3基因的第一组引物对， 其具有SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所 示的核苷酸序列； 用于检测人体体内PSA基因的第二组引物对， 其具有SEQ  ID NO： 4和SEQ   ID NO： 5所示的核苷酸序列； 用于检测人体体内TMPRSS2 ‑ERG融合基因的第三组引物对， 其 具有SEQ ID NO： 7和SEQ  ID NO： 8所示的核苷酸序列； 以及与上述 三组引物对相应的探针。 2.根据权利要求1所述的引物探针组合， 其特征在于， 所述引物探针组合还包括用于检 测ACTB内参基因的第四组引物对， 其具有SEQ  ID NO： 10和SEQ  ID NO： 11所示的核苷酸序 列； 以及相应的探针。 3.根据权利要求2所述的引物探针组合， 其特征在于， 与 所述四组引物对相应的探针依 次具有SEQ  ID NO： 3、 SEQ ID NO： 6、 SEQ  ID NO： 9、 SEQ ID NO： 12所示的核苷酸序列。 4.根据权利要求3所述的引物探针组合， 其特征在于， 所述探针的报告荧光基团的标记 包括FAM、 HEX、 VIC、 ROX、 TAMRA、 CY5中的一种； 其淬灭荧光基团的标记包括TAMRA、 BHQ1、 BHQ2、 MGB、 DABC YL、 BHQ3中的一种。 5.一种用于前列腺癌 早期诊断、 转移预警以及预后评估的试剂 盒， 其特征在于， 所述试 剂盒包括根据权利要求 1～4中任意一项 所述的用于前列腺癌早期诊断、 转移预警以及预后 评估的引物探针组合。 6.一种用于前列腺癌早期诊断、 转移预警以及预后评估的引物探针组合在制备前列腺 癌早期诊断、 转移预警以及预后评估的试剂中的应用， 其特征在于， 所述前列腺癌早期诊 断、 转移预警以及预后评估的方法包括以下步骤： S1： 提取尿液中的外泌体； S2： 提取外泌体的RNA； S3： 将提取的RNA作为模板， 加入根据权利要求1～4所述的引 物探针组合进行RT ‑qPCR 检测； S4： 通过计算PCA3  mRNA与PSA  mRNA表达量的比值以及TMPRSS2 ‑ERG基因融合表达量， 进行前列腺癌早期诊断、 转移预警以及预后评估。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 步骤S4包括： S41： 在ACTB扩增曲线正常的前提下， 根据公式： PCA3相对量＝2^[(Ct(PCA3) ‑Ct(PSA))]*1000 计算出PCA3相对表达量； S42： 在ACTB扩增曲线正常的前提下， 根据公式： TMPRSS2 ‑ERG相对量＝2 ^[(Ct(TMPRS S2‑ERG)‑Ct(PSA))]*1000计算出TMPRS S2‑ERG融合基因的相对表达量； S43： 根据公式： 综合判断值 ＝(PCA3相对量+TMPRS S2‑ERG相对量)/2， 计算综合判断值； S44： 根据上述综合判断值绘制ROC曲线并结合约登指数获得Cut ‑off值， 进行前列腺癌 早期诊断、 转移预警以及预后评估。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 通过对临床样本分析计算Cut ‑off值为35， 其中， 综合判断值≤35， 即为前列腺癌高风险人群， 综合判断值＞35， 即为前列腺癌低风险 人群。 9.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 通过对确认前列腺癌患者样本分析计算 Cut‑off值为32， 其中， 综合判断值≤32， 即为前列腺癌转移或者预后不良人群， 综合判断值 ＞32， 即为前列腺癌未转移或者预后良好人群。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114410787 A 210.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 步骤S3的扩增程序为： 50℃  10分钟； 95℃   5min预变性； 然后依次在95℃  10s， 58℃  15s， 72℃  60s*进行40个循环， 其中， 72℃  60s*为 荧光信号收集 步骤。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114410787 A 3