(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210077323.5 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 首都医科 大学附属北京胸科医院 地址 101100 北京市通州区北关大街9号院 申请人 北京市结核病胸部肿瘤研究所 (72)发明人 潘丽萍　谌蒙蒙　董静　史雨婷　 张宗德　孙琦　贾红彦　魏荣荣　 杜博平　邢爱英　 (74)专利代理 机构 北京象合知识产权代理事务 所(普通合伙) 11893 代理人 封明艳　郑慧娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/32(2006.01) (54)发明名称 一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及 其应用和试剂盒 (57)摘要 本发明涉及疾病诊断技术领域， 具体涉及一 种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用 和试剂盒。 一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记 物， 所述的分子标记物为miR ‑1587； hsa ‑miR‑ 1587序列如SEQ  ID NO.1所示。 本发明的优点： (1)成本低。 (2)敏感度高。 (3)特异性 好。 权利要求书1页 说明书9页 附图4页 CN 114369656 A 2022.04.19 CN 114369656 A 1.一种脑膜炎辅助诊断分子标记物， 其特征在于： 所述的分子标记物为miR ‑1587、 miR ‑ 3152‑3p和/或miR ‑7975。 2.如权利要求1的脑 膜炎辅助诊断分子标记 物， 其还包括miR‑21‑5p。 3.如权利要求1的脑膜炎辅助诊断分子标记物， 所述分子标志物为miR ‑1587和miR ‑21‑ 5p的组合或miR ‑3152‑3p和miR‑21‑5p组合。 4.如权利要求1 ‑3所述分子标志物在用于制备诊断脑膜炎诊断试剂或试剂盒中的用 途。 5.如权利要求 4所述用途， 所述诊断为区分结核性脑 膜炎和其 他感染性脑 膜炎。 6.一种脑膜炎辅助诊断试剂 盒， 其特征在于： 包括检测权利要求1 ‑3任一项所述标志物 表达量的试剂。 7.根据权利要求6所述试剂盒， 所述试剂盒还 包括RNA提取、 反转录及qPCR检测的试剂。 8.根据权利要求6所述试剂盒， 所述试剂盒还 包括获得脑脊液的试剂。 9.根据权利要求6所述试剂 盒， 所述检测表达的试剂为检测引物， 其中下游引物为通用 引物， 序列： 5 ’ ‑CTCAACTGGTGTCGTG GA‑3’； Cel‑miR‑39上游引物： 5 ‘‑GCCGAGAGCTGAT TTCGTCT‑3’ hsa‑miR‑21‑5p上游引物： 5 ’ ‑GCCGAGTAGCT TATCAGACTG ‑3’ hsa‑miR‑1587上游引物： 5 ’ ‑TCGGCAGGTTGGGCTGGGCT‑3’ hsa‑miR‑3152‑3p上游引物： 5 ’ ‑GCCGAGTGTGT TAGAATAGGG‑3’ hsa‑miR‑7975上游引物： 5 ’ ‑TCGGCAGGATCCTAGTCAC ‑3’。 10.权利要求6 ‑9任一项所述的诊断试剂盒在制备脑 膜炎诊断试剂或试剂盒中的用途。 11.根据权利要求10所述用途， 所述脑 膜炎为结核性脑 膜炎。 12.根据权利要求1 1所述用途， 所述诊断为区分结核性脑 膜炎和其 他感染性脑 膜炎。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114369656 A 2一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物及其应用和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及疾病诊断技术领域， 具体涉及 一种结核性脑膜炎辅助诊断分子标记物 及其应用和试剂盒。 背景技术 [0002]结核性脑膜炎患者早期的临床表 现和影像学变化均不具有特异性， 以及目前实验 室诊断试验的低敏感性， 导致结核性脑膜炎的临床诊断仍然具有明显的挑战性。 脑脊液中 结核分枝 杆菌的检测是确诊结核性脑膜炎的金标准， 但传统的脑 脊液涂片  Ziehl‑Neelsen 染色阳性率低(10～20％)， 脑 脊液结核分枝 杆菌培养时间长(6～8周)  且不够敏感(敏感度 为36％～81.8％)。 [0003]世界卫生组织建议将GeneXpert  MTB/RIF检测作为疑似结核性脑膜炎患者的诊 断， 然后再进 行镜检和培养， 但由于在利福平耐药性低的地区成本高且阳性预测价值低， 限 制了该检测的使用。 干扰素 ‑γ释放试验(IGRAs)及以及其他脑脊液实验室参数， 包括腺苷 脱氨酶(ADA)、 淋巴细胞计数、 葡萄糖和氯化物浓度， 都是非特异性的。 因此， 仍然迫切需要 寻找新的生物标志 物用于结核性脑 膜炎的诊断。 [0004]微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码的小分子单链RNA， 长度为20～25  个氨基 酸， 它与靶基因mRNA特异性结合， 参与机体内一系列复杂多变的基因调控过程， 在细胞增 殖、 组织分化、 细胞凋亡、 疾病发生发展等过程中起着重要作用。 miRNA具有高度保守性、 时 序性和组织特异性， 其表达异常与人体多种疾病的发生发展有着密切关系， 如肺癌、 糖尿 病、 脑血管病等。 越来越多的实验表明， miRNA在结核分枝杆菌感染过程中， 通过调节炎症反 应、 细胞因子信号激活、 单核细胞和中性粒细胞增殖、 淋巴细胞发育 分化等生命活动在免疫 应答中起到重要的调控作用， 其异常表达与结核病的发生、 进展、 转归相关。 另外， miRNA在 外周血、 胸腔积液和脑脊液等多种体液中可检测， 且稳定性较好， 显现其出作为生物标志物 的潜在可能性。 [0005]近年， 对于miRNA作为结核性脑膜炎生物标志物也有相关研究， 但研究不多， 且多 是关注结核性脑膜炎患者外周血中特定miRNA与对照组之间的表达差异。 CN110305953A是 发明人的在先申请， 其公开了一种检测miRNA表达量的系统在制备区分结核性脑膜炎和病 毒性脑膜炎产品中的应用； 所述miRNA为  hsa‑miR‑126‑3p、 hsa‑miR‑130a‑3p、 hsa‑miR‑ 151a‑3p和hsa‑miR‑199a‑5p， miRNA  表达量为外周血中miRNA的表达量。 说明书中还公开了 hsa‑miR‑21‑5p结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎之间存在差异表达， 但hsa ‑miR‑21‑5p在结核 性脑膜炎  (TBM)患者和正常人的外周血中不存在差异表达， 因此， 血浆hsa ‑miR‑21‑5p无法 作为标志 物用于结核性脑 膜炎的诊断。 [0006]目前临床上主要存在结核性脑膜炎与其他感染性脑膜炎鉴别困难。 因此， 以往验 证的部分miRNA虽然在结核性脑膜炎患者的表达水平明显高于或低于健康对照， 但这些 miRNA在临床中实际应用会相 对受限。 另外， 相比于血浆和 外周血， 脑脊液是结核性脑膜炎 病灶部位的直接相关体液， 其中含有丰富的蛋白和非编码核酸信息， 且不同体液中mi RNA表说　明　书 1/9 页 3 CN 114369656 A 3