(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210081720.X (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 涂金星　秦培　高金祥　 (74)专利代理 机构 武汉宇晨专利事务所(普通 合伙) 42001 代理人 龚莹莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 用于油菜雌不育种质资源突变体鉴定的 Indel分子标记及应用 (57)摘要 本发明属于油菜生物学领域， 具体涉及用于 油菜雌不育种质资源突变体鉴定的Indel分子标 记及应用。 申请人发现了一株雌不育甘蓝型油 菜， 遗传分析表明： 雌不育性状受2个隐性核基因 控制， 一个位于ChrA07  30‑kb区间， 与其紧密连 锁的标记为ID4 ‑62和ID4‑66； 另一个位于Chr C06  67‑kb区间， 与其紧密连锁的标记为SS3 ‑C6‑9和 SS3‑C6‑13。 以引物组ID4 ‑62和SS3‑C6‑13为鉴定 组合， 可对甘蓝型油菜雌不育材料进行鉴定， 该 材料的发掘， 为了解植物雌配子发生机制的研究 以及雌不育性状的应用提供 材料基础。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图5页 CN 114231662 A 2022.03.25 CN 114231662 A 1.甘蓝型油菜雌不育种质资源突变体鉴定的Indel分子标记引物组， 所述引物组为： ID4‑62： acaaactgatcgaggacaaaag、 actactcaacaaaggcgtattt； 和SS3 ‑C6‑13： ccggatctagggttttatgactt、 taacgagtattcatgcccagc。 2.权利要求1所述的引物组在甘蓝型油菜雌不育材 料鉴定中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 所述的甘蓝型油菜雌不育材 料为油菜95 38R。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114231662 A 2用于油菜雌不育种质资源 突变体鉴定的Indel分子标记及 应用 技术领域 [0001]本发明属于油菜生物学领域， 具体涉及用于油菜雌不育种质 资源突变体鉴定的 Indel分子标记及应用。 背景技术 [0002]甘蓝型油 菜是世界上重要的油料作物， 起源于大约7500年前， 由白菜和甘蓝自发 杂交形成(Chalhoub  et al.,2014)。 杂种优势是自然界普遍存在的生物学现象， 近年来已 逐渐成为提高作物产量的有效措施(Kempe&Gils,2 011； Wang&Deng,2 018)。 作物产量一般由 单位面积穗数， 每穗粒数和粒重构成(Chen  et al.,2007)， 同时， 植株的结实率也是构成产 量的重要因素之一(Zuo  and Li,2014； Xiang  et al.,2019)。 影响植株结实率的因素有很 多， 包括遗传因素(由于花器官相关基因的缺陷)、 环境因素和栽培技 术等。 [0003]结实率相关基因已有报道， 其中， 异常性器官发生会影响结实率， 如水稻花粉半不 育突变体pss1， 因花粉活力降低和缺陷的花药开裂， 导致小穗育性降低40％左右(Zhou  et  al.,2011)。 水稻的lss1基因突变后， 由于异常的花粉 萌发、 花粉 管穿透和花粉 管生长， 使结 实率降低了39.49 ‑62.27％(Xianget  al.,2019)。 T ‑DNA插入的水稻OsAPC6突变体， 因受精 卵有丝分裂时极核数量减少， 导致结实率降低了40 ‑45％(Awasthi  et al.,2012)。 通过 CRISPR/Cas9系统敲除在水稻穗发育时期的胚珠中发挥作用的ESD1基因， 得到的纯合突变 体由于成熟胚囊中无卵细胞和助细胞， 使结实率降低26 ‑31％(Wang  et al.2021)。 [0004]异常雄性器官的发生可以通过补充外来花粉提高结实率， 但是雌性器官的发育缺 陷却无法挽救。 [0005]由于雌性不育 的表型不易鉴定、 突变体不易获得和遗传机制复杂等原因， 导致我 们对雌性 不育机制的研究相对落后。 [0006]植物雌性器官发育缺陷主要有三种类型(Li  et al.,2006)。 ①花无雌蕊(柱头、 花 柱和子房)， 或雌蕊不完全； ②具有完整雌蕊， 但胚珠发育异常， 一种情况是大孢子母细胞减 数分裂异常， 不能形成有功能的大孢子(Rim  et al.,1990； Kazimierska&Kazimierski, 1995)； 另一种情况虽然 能形成有功能的大孢子， 却不能正常进行有丝分裂， 无法产生成熟 的8核胚囊(Kubo&Yo shimura,2 005； Lillecrapp  et al.,1999； Ch en et al.,2017)；③胚珠 正常但授粉后胚胎发育异常(Rosellini  et al.,2003)。 相对于后两者， 第一种雌性器官发 育缺陷类型的报道寥 寥无几。 发明内容 [0007]本发明的目的在于提供了甘蓝型油菜雌不育种质资源突变体鉴定的Indel分子标 记引物组， 所述引物组为： ID4 ‑62： acaaactgatcgaggacaaaag、 actactcaacaaaggcgtattt； SS3‑C6‑13： ccggatctagggttttatgactt、 taacgagtattcatgcccagc。 [0008]本发明的另一个目的在于提供了甘蓝型油菜雌不育种质资源突变体鉴定的Indel说　明　书 1/7 页 3 CN 114231662 A 3