(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210077259.0 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 唐艳艳　李鑫　胡畅丽　周文杰　 孙明明　乔利仙　朱虹　隋炯明　 王晶珊　刘文平　 (74)专利代理 机构 山东三邦知识产权代理事务 所(普通合伙) 37308 代理人 牛继梅　高洋 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/02(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 一种与花生乙烯不敏感以及耐盐相关性状 紧密连锁的分子标记及应用 (57)摘要 本发明公开了一种与花生乙烯不敏感以及 耐盐相关性状紧密连锁的分子标记及应用， 属于 植物分子遗传学和分子育种技术领域。 本发明所 述的与花生乙烯不敏感以及耐盐相关性状紧密 连锁的分子标记为InDel标记Arahy01063和/或 Arahy01102 。 通过使用本发明的分子 标记可以实 现花生乙烯 不敏感及耐盐性状的快速检测， 且排 除环境的影响， 对于花生分子育种， 加快花生耐 盐品种的培 育过程具有重要的应用价 值。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 114381547 A 2022.04.22 CN 114381547 A 1.一种与花生乙烯不敏感以及耐盐相关性状紧密连锁的分子标记， 其特征在于， 所述 分子标记为 InDel标记 Arahy01063和/或Arahy01102； 其中， 在乙烯敏感且不耐盐的花生中Arahy01063的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 在 乙烯不敏感且耐盐的花 生中Arahy01063的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 在乙烯不敏感且耐盐的花生中Arahy01102的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 在乙烯 敏感且不耐盐的花 生中Arahy01102的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示。 2.权利要求1所述分子标记在花 生乙烯不敏感以及耐盐性状筛 选中的应用。 3.一种筛 选花生乙烯不敏感以及耐盐性状的方法， 其特 征在于， 步骤如下： 提取待筛选花生的基因组DNA作为模板， 采用扩增Arahy01063和/或Arahy01102 分子标 记的引物对， 进行PCR扩增， 检测扩增产物； 若Arahy01063标记 的PCR扩增产物出现单一的 163bp大小的特征条带， 则判定待测花生材料为乙烯敏感不耐盐， 若出现一条179bp大小的 特征条带或出现163bp和179b p大小的两条特征条带， 则判定待测花生材料为乙烯 不敏感且 耐盐； 若Arahy01102标记的PCR扩增产物出现182bp大小的特征条带， 则判定待测花生材料为 乙烯敏感不耐盐； 若出现一条171bp大小的特征条带或出现171bp和182bp大小的两条特征 条带， 则判定待测花 生材料为乙烯不敏感且耐盐。 4.根据权利要求3所述筛选花生乙烯不敏感以及耐盐性状的方法， 其特征在于， 扩增 InDel标记 Arahy01063的引物序列为： Arahy01063‑F:5’ ‑AAGCACAGA ATATGGGTGGA‑3’； Arahy01063‑R:5’ ‑CACTTCGTCCTTTGCATTCT‑3’； 扩增InDel标记 Arahy01102的引物序列为： Arahy01102‑F:5’ ‑GAGTGATGTAG GGATTGTTGAAG‑3’； Arahy01102‑R:5’ ‑TGAAATCACAGA AATACACACA AA‑3’。 5.根据权利要求3所述筛 选花生乙烯不敏感以及耐盐性状的方法， 其特 征在于， 所述扩增Arahy01063时PCR的反应程序为： 预变性95℃4min； 94℃30s， 58℃30s， 72℃ 25s， 35个循环； 72℃延伸5mi n； 所述扩增Arahy01102时PCR的反应程序为： 预变性95℃4min； 94℃30s， 57℃30s， 72℃ 25s， 35个循环； 72℃延伸5mi n。 6.权利要求3 ‑5任一项所述筛选花生乙烯不敏感以及耐盐性状的方法在花生乙烯不敏 感且耐盐品种选 育中的应用。 7.一种花生乙烯不敏感且耐盐品种选育的方法， 其特征在于， 在育种过程中采用 Arahy01063和/或Arahy01102分子标记来鉴定真假杂交种或筛选乙烯不敏感且耐盐的花生 品种。 8.根据权利要求7所述花生乙烯不敏感且耐盐品种选育的方法， 其特征在于， 具体步骤 如下， 以乙烯敏感且不耐盐和乙烯不敏感且耐盐的花生品种作为亲本进行杂交， 采用 Arahy01063和/或Arahy01102分子标记来鉴定真假杂交种； 筛选的真杂交种与乙烯敏感且 不耐盐的亲本连续进行4次回交， 每次回交后采用Arahy01063和/或Arahy01102分子标记来 筛选具有乙烯不敏感且耐盐性状的子代， 最 终得到的子代再进 行4次自交， 每次自交后筛选权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114381547 A 2综合性状良好的单株， 并辅助采用Arahy01063和/或Arahy01102分子标记来筛选具有乙烯 不敏感且耐盐性状的子代； 最终 获得的株系用于进一 步扩繁材 料。 9.根据权利要求7所述花生乙烯不敏感且耐盐品种选育的方法， 其特征在于， 扩增 InDel标记 Arahy01063的引物序列为： Arahy01063‑F:5’ ‑AAGCACAGA ATATGGGTGGA‑3’； Arahy01063‑R:5’ ‑CACTTCGTCCTTTGCATTCT‑3’； 扩增InDel标记 Arahy01102的引物序列为： Arahy01102‑F:5’ ‑GAGTGATGTAG GGATTGTTGAAG‑3’； Arahy01102‑R:5’ ‑TGAAATCACAGA AATACACACA AA‑3’。 10.权利要求1所述的分子标记在制备检测花生乙烯不敏感且耐盐性状的试剂中的应 用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114381547 A 3