(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210077326.9 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 宁波大学 地址 315832 浙江省宁波市宁波大 学梅山 校区海洋学院南楼6 06 (72)发明人 崔朝霞　杨亚男　冯天翼　张鹏　 韩睿　鲁文涛　 (74)专利代理 机构 厦门原创专利事务所(普通 合伙) 35101 专利代理师 高巍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列 及性别鉴定方法 (57)摘要 本发明提供了一种中华绒螯蟹的性别鉴定 特异性DNA序列及性别鉴定方法， 其核苷酸序列 如SEQ ID NO:1所示。 该性别鉴定 方法， 包括以下 步骤： S1， 提取中华绒螯蟹的基因组DNA； S2， 以基 因组DNA为模板进行PCR扩增； 所述PCR扩增的上 游引物为如SEQ  ID NO:2所示， 下游引物如SEQ   ID NO:3所示； S3， 扩增产物进行琼脂糖电泳检 测， 具有特异性扩增条带的为雌性， 否则为雄性。 该方法鉴定准确率高， 简单易操作， 适用于中华 绒螯蟹胚胎阶段和幼体阶段的性别鉴定 。 权利要求书1页 说明书3页 序列表2页 附图2页 CN 114438222 A 2022.05.06 CN 114438222 A 1.一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列， 其特征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID  NO:1所示。 2.一种中华绒螯蟹的性别鉴定方法， 其特征在于， 通过鉴定权利要求1所述的特异性 DNA序列来实现。 3.根据权利要求2所述的中华 绒螯蟹的性别鉴定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1， 提取中华 绒螯蟹的基因 组DNA； S2， 以基因组DNA为模板进行PCR扩增； 所述PCR扩增的上游引物为如SEQ  ID NO:2所示， 下游引物如SEQ  ID NO:3所示； S3， 扩增产物进行琼脂糖电泳检测， 具有特异性扩增条 带的为雌性， 否则为 雄性。 4.根据权利要求3所述的中华绒螯蟹的性别鉴定方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程 序为95℃预变性3分钟， 95℃变性30秒， 55℃退火30秒， 72℃延伸60秒， 30个循环， 72℃ 保温 10分钟， 4℃保存。 5.一种中华绒螯蟹的性别鉴定的引物对， 其特征在于， 所述引物对的上游引物如SEQ   ID NO:2所示， 下游引物如SEQ  ID NO:3所示。 6.一种中华 绒螯蟹的性别鉴定的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求6所述的引物对。 7.根据权利要求7所述的中华绒螯蟹的性别鉴定的试剂盒， 其特征在于， 还包括DNA提 取试剂和PCR试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438222 A 2一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列及性别鉴定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列及性别鉴定方法， 属于中 华绒螯蟹性别鉴定技 术领域。 背景技术 [0002]性别二态性在动物的形态和行为中普遍存在， 并且在养殖经济动物中作为一种经 济性状， 影响动物的生长速度和产品品质。 现今， 许多 水产养殖动物可通过性别调控技术 实 现单性化养殖从而提高产量， 改善品质。 中华绒螯蟹是我国一种极具经济价值同时具有较 高产量的水产养殖经济类甲壳动物。 中华绒螯蟹在生长过程中具有明显的性别二态性， 雄 蟹个体体积更大， 生长速度更快， 而雌蟹营养价值更高。 因此， 开展中华绒螯蟹性别调控的 研究对水产养殖业将产生非常高的经济价 值。 [0003]不同于其他物种， 中华绒螯蟹至今仍然没有明确的性别决定机制报道， 甚至尚未 确定是否有性别染色体的存在。 此外， 中华绒螯蟹性别调控机制研究的难点在于在胚胎阶 段和幼体阶段无法通过形态鉴定性别， 需要通过性别特异性DNA序列鉴定。 现有技术中， 还 未见报道有效的性别特异 性DNA序列信息及获取方法。 因此， 急 需一种在基因组层面上快速 进行性别鉴定的DNA序列， 对中华 绒螯蟹胚胎阶段和幼体阶段进行性别鉴定 。 发明内容 [0004]本发明提供了一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列及性别鉴定方法， 可以 有效解决上述问题。 [0005]本发明是这样实现的： [0006]一种中华 绒螯蟹的性别鉴定特异性DNA序列， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0007]一种中华 绒螯蟹的性别鉴定方法， 通过鉴定上述的特异性DNA序列来实现。 [0008]作为进一 步改进的， 包括以下步骤： [0009]S1， 提取中华 绒螯蟹的基因 组DNA； [0010]S2， 以基因组DNA为模板进行PCR扩增； 所述PCR扩增的上游引物为如SEQ  ID NO:2 所示， 下游引物如SEQ  ID NO:3所示； [0011]S3， 扩增产物进行琼脂糖电泳检测， 具有特异性扩增条 带的为雌性， 否则为 雄性。 [0012]作为进一步改进的， 所述PCR扩增的程序为95℃预变性3分钟， 95℃变性30秒， 55℃ 退火30秒， 72℃延伸6 0秒， 30个循环， 72℃保温10分钟， 4℃保存。 [0013]一种中华绒螯蟹的性别鉴定的引物对， 所述引物对的上游引物为如SEQ  ID NO:2 所示， 下游引物如SEQ  ID NO:3所示。 [0014]一种中华 绒螯蟹的性别鉴定的试剂盒， 包括上述的引物对。 [0015]作为进一 步改进的， 所述试剂盒还 包括DNA提取 试剂和PCR试剂。 [0016]本发明的有益效果是： [0017]本发明的中华绒螯蟹的性别鉴定方法可以对中华绒螯蟹胚胎阶段和幼体阶段进说　明　书 1/3 页 3 CN 114438222 A 3