(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210081552.4 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 水利部中国科 学院水工程 生态研究 所 地址 430079 湖北省武汉市洪山区卓刀泉 雄楚大街578号 (72)发明人 熊美华　邵科　曾昌　董微微　 李伟涛　阙延福　朱滨　 (74)专利代理 机构 湖北武汉 永嘉专利代理有限 公司 42102 专利代理师 乐综胜　李艳景 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种细尾高原鳅鱼类微卫星标记及其扩增 引物和应用 (57)摘要 本发明公开了一种细尾高原鳅微卫星标记 及其扩增引物和应用。 本发明提供22 个细尾高原 鳅的微卫星标记， 以及相应扩增引物对， 为不同 流域细尾高原鳅种群的遗传分析提供分析数据， 为后期结合形态学性状方面的差异进行更深入 分析提供基础， 应用于细尾高原鳅鱼类群体遗传 多样性研究、 遗传结构分析和物种资源保护等领 域。 权利要求书2页 说明书7页 序列表12页 CN 114480668 A 2022.05.13 CN 114480668 A 1.一种细尾高原鳅鱼类微卫星标记， 其特征在于， 所述微卫星标记的核苷酸序列分别 如SEQ ID NO： 1‑22所示。 2.一种用于扩增权利要求1所述的细尾高原鳅鱼类多态性微卫星标记的引物对， 其特 征在于， 所述引物对为： 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 23、 SEQ  ID NO： 24的引物对， 用于扩增核苷酸序列如SEQ   ID NO： 1所示的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 25、 SEQ  ID NO： 26的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 2的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 27、 SEQ  ID NO： 28的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 3的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 29、 SEQ  ID NO： 30的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 4的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 31、 SEQ  ID NO： 32的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 5的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 33、 SEQ  ID NO： 34的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 6的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 35、 SEQ  ID NO： 36的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 7的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 37、 SEQ  ID NO： 38的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 8的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 39、 SEQ  ID NO： 40的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 9的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 41、 SEQ  ID NO： 42的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 10的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 43、 SEQ  ID NO： 44的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 11的微卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 45、 SEQ  ID NO： 46的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 12的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 47、 SEQ  ID NO： 48的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 13的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 49、 SEQ  ID NO： 50的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 14的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 51、 SEQ  ID NO： 52的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 15的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 53、 SEQ  ID NO： 54的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 16的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 55、 SEQ  ID NO： 56的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 17的微 卫星标记。 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 57、 SEQ  ID NO： 58的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480668 A 2ID NO： 18的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 59、 SEQ  ID NO： 60的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 19的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 61、 SEQ  ID NO： 62的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 20的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 63、 SEQ  ID NO： 64的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 21的微 卫星标记。 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 65、 SEQ  ID NO： 66的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 22的微卫星标记。 3.一种权利要求1所述的细尾高原鳅鱼类微卫星标记或权利要求2所述的扩增所述微 卫星标记的引物对在检测细尾高原鳅鱼类种群遗传多样性中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述应用包括如下步骤： (1)提取细尾高原鳅鱼类 基因组DNA； (2)微卫星PCR扩增： 将序列为SEQ  ID NO： 23‑66的引物对分别进行荧光标记后， 以步骤 (1)所得细尾高原鳅鱼类 基因组DNA为模板进行PCR扩增， 获得微 卫星扩增产物； (3)测序仪检测扩增产物： 将步骤(2)所得扩增产物避光保存， 进行毛细 管电泳和 STR分 析； (4)遗传多样性分析： 根据每个细尾高原鳅鱼类个体微卫星扩增产物 的分子量大小确 定基因型， 计算遗传多样性 参数。 5.一种权利要求1所述的细尾高原鳅鱼类微卫星标记或权利要求2所述的扩增所述微 卫星标记的引物对在检测细尾高原鳅群体遗传多样性水平、 分析遗传结构、 保护物种资源 方面的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480668 A 3