(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210079733.3 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 水利部中国科 学院水工程 生态研究 所 地址 430079 湖北省武汉市洪山区卓刀泉 雄楚大街578号 (72)发明人 邵科　熊美华　董微微　曾昌　 朱滨　阙延福　李伟涛　 (74)专利代理 机构 湖北武汉 永嘉专利代理有限 公司 42102 专利代理师 乐综胜　李艳景 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种戴氏山鳅鱼类微卫星标记及其扩增引 物和应用 (57)摘要 本发明公开了一种戴氏山鳅鱼类微卫星标 记及其扩增引物和应用。 本发明提供21个戴氏山 鳅的微卫星标记， 以及相应扩增引物对， 并将其 应用于戴氏山鳅遗传多样性的研究中， 不仅解决 了目前没有戴氏山鳅鱼类核基因标记的现状， 并 能辅助形态学方法鉴定戴氏山鳅鱼类， 为山鳅属 鱼类遗传结构分析、 遗传资源保护提供数据、 奠 定基础。 权利要求书2页 说明书7页 序列表12页 CN 114438223 A 2022.05.06 CN 114438223 A 1.一种戴氏山鳅鱼类微卫星标记， 其特征在于， 所述微卫星标记的核苷酸序列分别如 SEQ ID NO： 1‑21所示。 2.一种用于扩增权利要求1所述的戴氏山鳅鱼类多态性微卫星标记的引物对， 其特征 在于， 所述引物对为： 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 22、 SEQ  ID NO： 23的引物对， 用于扩增核苷酸序列如SEQ   ID NO： 1所示的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 24、 SEQ  ID NO： 25的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 2的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 26、 SEQ  ID NO： 27的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 3的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 28、 SEQ  ID NO： 29的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 4的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 30、 SEQ  ID NO： 31的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 5的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 32、 SEQ  ID NO： 33的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 6的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 34、 SEQ  ID NO： 35的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 7的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 36、 SEQ  ID NO： 37的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 8的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 38、 SEQ  ID NO： 39的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 9的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 40、 SEQ  ID NO： 41的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 10的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 42、 SEQ  ID NO： 43的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 11的微卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 44、 SEQ  ID NO： 45的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 12的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 46、 SEQ  ID NO： 47的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 13的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 48、 SEQ  ID NO： 49的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 14的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 50、 SEQ  ID NO： 51的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 15的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 52、 SEQ  ID NO： 53的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 16的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 54、 SEQ  ID NO： 55的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 17的微 卫星标记。 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 56、 SEQ  ID NO： 57的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114438223 A 2ID NO： 18的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 58、 SEQ  ID NO： 59的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 19的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 60、 SEQ  ID NO： 61的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 20的微 卫星标记； 上下游序列分别为SEQ  ID NO： 62、 SEQ  ID NO： 63的引物对， 用于扩增核苷酸序列为SEQ   ID NO： 21的微 卫星标记。 3.一种权利要求1所述的戴氏山鳅鱼类微卫星标记或权利要求2所述的扩增所述微卫 星标记的引物对在检测戴氏山鳅鱼类种群遗传多样性中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述应用包括如下步骤： (1)提取戴氏山鳅鱼类 基因组DNA； (2)微卫星PCR扩增： 将序列为SEQ  ID NO： 22‑63的引物对分别进行荧光标记后， 以步骤 (1)所得戴氏山鳅鱼类 基因组DNA为模板进行PCR扩增， 获得微 卫星扩增产物； (3)测序仪检测扩增产物： 将步骤(2)所得扩增产物避光保存， 进行毛细 管电泳和 STR分 析； (4)遗传多样性分析： 根据每个戴氏山鳅鱼类个体微卫星扩增产物 的分子量大小确定 基因型， 计算遗传多样性 参数。 5.一种权利要求1所述的戴氏山鳅鱼类微卫星标记或权利要求2所述的扩增所述微卫 星标记的引物对在辅助鉴定戴氏山鳅种类、 保护戴氏山鳅鱼类物种资源方面的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114438223 A 3