(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210076336.0 (22)申请日 2022.01.24 (71)申请人 中国水产科 学研究院黄海水产研究 所 地址 266000 山东省青岛市 市南区南京路 106号 (72)发明人 白昌明　谷莉　辛鲁生　王崇明　 (74)专利代理 机构 山东三邦知识产权代理事务 所(普通合伙) 37308 代理人 张立得　肖太升 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测鲍疱疹病毒的引物组及其在构建病毒 检测方法和试剂盒中的应用 (57)摘要 本发明公开了检测鲍疱疹病毒的引物组及 其在构建病毒检测方法和试剂盒中的应用， 属于 生物检测技术领域。 本发明所述检测鲍疱疹病毒 的引物组是根据 SEQ ID No:1所示的核 酸序列设 计的， 在此基础上， 可将本发明所述的引物组应 用在原位LAMP检测方法中以实现鲍疱疹病毒的 快速检测， 同时， 利用上述原位LAMP检测方法还 可以快速完成石 蜡组织切片中HaHV ‑1的检测， 并 实现对病毒在组织中的精确定位， 以明确HaHV ‑1 在鲍组织器官中的分布规律。 由于本发明所述的 引物组灵敏度高、 特异性好， 还可将其制备成试 剂盒， 以实现鲍疱疹病毒的快速和简便检测， 应 用前景广阔。 权利要求书2页 说明书7页 序列表5页 附图4页 CN 114085931 A 2022.02.25 CN 114085931 A 1.检测鲍疱疹病毒的引物组， 其特 征在于， 所述引物组的序列为： F3： 5'‑GACGAAGAGCTCGCGA AAT‑3'； B3： 5'‑CTTTGGCATGTCGC CCTT‑3'； FIP： 5'‑CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTTTCTACGACG GGGAAGCTAAC‑3'； BIP： 5'‑GATGTGTACGAC CCCGACACGGTCCCAGCGCTCTCTGA A‑3'； F2： 5'‑TCTACGACG GGGAAGCTAAC‑3'； F1c： 5'‑CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTT‑3'； B2： 5'‑GTCCCAGCGCTCTCTGA A‑3'； B1c： 5'‑GATGTGTACGAC CCCGACACG‑3'； 或 F3： 5'‑GTCCGGAAACTCCATCTACG ‑3'； B3： 5'‑GGAAACTCTGGGAGGAGGTA‑3'； FIP： 5'‑TGGTCGCCCTTTCTATGTC CGTGAGCG GAAGAATCGGAGGAT‑3'； BIP： 5'‑ACCTCTGGACCGTCTTCCATGTCGACA AGGTCTGAGGTTCAA‑3'； F2： 5'‑GAGCGGAAGAATCGGAGGAT‑3'； F1c： 5'‑TGGTCGCCCTTTCTATGTC CGT‑3'； B2： 5'‑CGACAAGGTCTGAGGTTCAA‑3'； B1c： 5'‑ACCTCTGGACCGTCTTCCATGT‑3'； 或 F3： 5'‑CACGGATTCCACGTCGTC ‑3'； B3： 5'‑AGCGCTCTCTGA ACAGCT‑3'； FIP： 5'‑TCCCCGTCGTAGA ATTTCGCGAGCGCT TGAACCTCAGACC‑3'； BIP： 5'‑TTGCGGATGGGGCCTTACAAATAGGACCGTGCGTGTCG ‑3'； F2： 5'‑GCGCTTGAACCTCAGACC‑3'； F1c： 5'‑TCCCCGTCGTAGA ATTTCGCGA‑3'； B2： 5'‑ATAGGACCGTGCGTGTCG ‑3'； B1c： 5'‑TTGCGGATGGGGCCTTACAA‑3'。 2.权利要求1所述引物组在制备用于检测鲍疱疹病毒的试剂盒中的应用。 3.一种用于检测鲍疱疹病毒的试剂盒， 其特 征在于， 包括如权利要求1所述的引物组。 4.根据权利 要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括反应缓冲液、 Bst  DNA 聚合酶、 dNTPs、 硫酸镁、 甜菜碱 。 5.一种非诊疗目的 的鲍疱疹病毒的LAMP检测方法， 其特 征在于， 步骤如下： 以权利要求1所述的引物组为LAMP引物， 对待测样品进行LAMP扩增， 根据显色结果判断 样品中是否含有鲍疱疹病毒。 6.根据权利要求5所述的LAMP检测方法， 其特征在于， LAMP扩增温度 为59~65℃， 扩增时 间为60min。 7.一种确定 HaHV‑1在鲍鱼组织中分布规 律的方法， 其特 征在于， 步骤如下： 将鲍鱼组织石蜡切片进行脱蜡、 水化、 消化和变性处理， 然后进行原位LAMP扩增， 扩增 结束后， 对切片进 行抗体孵育、 显 色、 复染和脱 水处理， 最后封片， 置于显微镜下观察组织切权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114085931 A 2片的杂交信号， 获得HaHV ‑1在组织中的分布规 律； 原位LAMP扩增的引物为权利要求1所述的引物组。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114085931 A 3