(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210090257.5 (22)申请日 2022.01.25 (71)申请人 中国科学院武汉植物园 地址 430000 湖北省武汉市东湖新 技术开 发区九峰一路201号 (72)发明人 王彦昌　鲁雪梅　高磊　於晓芬　 满玉萍　雷瑞　姜正旺　 (74)专利代理 机构 武汉宇晨专利事务所(普通 合伙) 42001 专利代理师 江丽丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记引物 及应用 (57)摘要 本发明属于植物分子标记领域， 公开了一种 用于软枣猕猴桃种质性别鉴定的分子标记引物 及其应用， 包括2个分子 标记M1和M2， 能够准确地 将软枣猕猴桃中的雄性植株和雌性植株区分开 来。 该标记有效克服了在幼苗期 难以区分软枣猕 猴桃雄株和雌株的缺点， 避免了在育种期间大量 的雄性植株造成的生产和资源上的浪费， 显著缩 短了育种周期； 另外还能够帮助软枣猕猴桃野生 资源的鉴定， 大大提高资源收集的效率。 该标记 在软枣猕猴桃种质资源鉴定和育种上具有十分 广阔的应用价 值。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 115449559 A 2022.12.09 CN 115449559 A 1.用于软枣猕猴桃的性别鉴定的分子标记引物， 其特征在于， 分子标记M1的扩增引物 的序列如SEQ  ID NO.1和2所示， 分子标记M2的扩增引物的序列如SEQ  ID NO.3和4所示。 2.一种用于软枣猕猴桃性别鉴定的试剂盒， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO.1‑4所示序列 的引物。 3.权利要求1所述的分子标记在软 枣猕猴桃的性别鉴定或性别辅助选 育中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115449559 A 2用于软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记引物及应用 技术领域 [0001]本发明属于植物分子标记领域， 具体涉及 一种用于软枣猕猴桃 性别鉴定的分子标 记引物及其应用。 背景技术 [0002]软枣猕猴桃为猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)多年生落叶藤本 植物， 果实大小与枣相似， 味道鲜美， 风 味独特， 果皮光滑可食用， 具有丰富的维生素、 膳食 纤维、 氨基酸、 多糖等营养价值。 另外， 它是一种药食同源的植物， 根茎叶均可入药， 对于降 血压、 降血脂、 预防心脑血管疾病都有良好的作用。 软枣猕猴桃分布十分广泛， 在我国的东 北、 华北、 西北及华南等地区均有分布， 给育种工作提供了大量的野生资源。 但是软枣猕猴 桃属于功能性雌雄异株， 实生育种过程中存在3 ‑5年的童期， 开花前无法区分的雄株占用了 大量的人力和物力， 造成了极大的浪费。 另外， 在软枣猕猴桃种质资源的野外 收集过程中， 如何对无花无果的植株快速有效的鉴定性别加速资源收集进程 也是育种家关心的问题。 [0003]近年来， 已有一些关于猕猴桃属植物性别鉴定分子标记的研究报道， 如Gill等利 用BSA法在中华猕猴桃中开发的SmX和SmY1标记(GILL  GP,HARVEY  CF,GARDNER  RC,et  al.Development  of sex linked PCR markers for gender identification  in  Actinidia.Theoretical&AppliedGenetics,1998,97(3):439 ‑445.)， 以及张琼等在山梨猕 猴桃和中华猕猴桃杂 交后代中利用RAD ‑seq技术开发的SSR标记A001、 A002和A003(ZHANG   Q,LIU CY,LIU YF,et al.High‑density interspecific  genetic maps of kiwifruit   and the identification  of sex specific  markers.DNA  Research,2015,22(5):367 ‑ 375.)。 由于猕猴桃种质的遗传多样性丰富以及软枣猕猴桃的倍性复杂， 这些标记在软枣猕 猴桃中并没有很好的通用性， 难以满足软枣猕猴桃育种工作的需求。 因此， 开 发一种通用性 强、 操作简单、 高准确 性的针对软枣猕猴桃早期性别鉴定的分子标记辅助软枣猕猴桃育种 具有重要的现实意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种用于软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记引物组合及其 应用， 能够快速地将雄 性和雌性软 枣猕猴桃植株区分开 来， 操作简单， 重复性 好， 准确度高。 [0005]为了达到上述目的， 本发明采用以下技 术方案： [0006]申请人收集了不 同地理来源的100份软枣猕猴桃种质资源作为实验材料， 通过对 这些样品进行全基因组重测序， 比对参考基因组， SNP筛选以及与性别的全基因组关联分 析， 得到了可能的性别关联位点， 结合基因注释结果， 在软枣猕猴桃雌、 雄样本差异区段设 计特异性引物， 开 发雌雄性别鉴定的特异标记。 最终得到2对分子标记引物可准确鉴定出软 枣猕猴桃雄 性和雌性 植株。 [0007]用于PCR扩增分子标记M1的引物序列为： [0008]正向引物M1 ‑F： 5'‑ATGGCAAAGTGGTTCTCTCTCC ‑3'(SEQ ID NO.1)和反向引物M1 ‑R:说　明　书 1/3 页 3 CN 115449559 A 3