(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210087229.8 (22)申请日 2022.01.25 (71)申请人 湖北省农业科 学院畜牧兽医研究所 地址 430064 湖北省武汉市洪山区南湖瑶 苑特4号畜牧所 (72)发明人 张宇　周佳伟　吴俊静　徐忠　 李梓芃　孙华　乔木　彭先文　 梅书棋　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 张璐 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状筛选和 猪育种中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种猪SNP分子标记在猪乳头 数性状筛选和猪育种中的应用， 其中所述乳头数 性状为左侧乳头数性状、 右侧乳头数性状和总乳 头数性状； 所述分子标记的核苷 酸序列如序列表 SEQ ID NO.1所示， 在该序列的第356bp处存在一 处C>T碱基突变。 本发明还提供了一种用于扩增 上述分子标记的引物对以及利用上述分子标记 进 行 选 育的 方 法 。本发 明 首次 发 掘了 猪 ENSSSCG00000002825基因 中的一个SNP分子标记 与猪的左侧乳头数性状、 右侧乳头数性状和总乳 头数性状相关， 因此可用于猪标记辅助选择育 种， 即提供了猪ENSSSCG0000000282 5基因中一个 SNP分子标记在猪乳头数性状的标记辅助育种的 新用途， 实现了对猪乳头数性状的早期筛选， 筛 选方法简单 快速。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114574593 A 2022.06.03 CN 114574593 A 1.一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状筛选和/或猪育种中的应用， 其特征在于， 所述 乳头数性状为左侧乳头数性状、 右侧乳头数性状和总乳头数性状； 所述分子标记的核苷酸 序列如序列表SEQ  ID NO.1所示， 在该序列的第3 56bp处存在一处C>T碱基突变。 2.根据权利要求1所述的一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状筛选和/或猪育种中的应 用， 其特征在于， 序列SEQ  ID NO.1中第356bp处的C或T碱基多态性位点， 表现为CC、 TC或TT 三种基因型， 其中T等 位基因为优势等 位基因。 3.一种用于扩增权利要求1所述的分子标记的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括： 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 4.如权利要求3所述的引物对在猪乳 头数性状筛 选和/或猪育种中的应用。 5.一种试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求3所述的引物对。 6.一种猪乳 头数性状筛 选和/或猪选 育的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 提取猪的基因 组DNA； S2、 以步骤S1得到的基因组DNA作为模板， 采用如权利要求3所述的引物对进行PCR扩 增， 得到如权利要求1所述的分子标记并纯化； S3、 对步骤S2纯化后的分子标记进行测序分析， 保留该序列第356bp处携带有T等位基 因的个体， 淘汰携带有C等 位基因的个 体。 7.根据权利要求6所述猪乳头数性状筛选和/或猪育种猪选育的方法， 其特征在于， 步 骤S1中， 从待测猪的耳缘组织中提取基因 组DNA。 8.根据权利要求6所述猪乳头数性状筛选和/或猪育种猪选育的方法， 其特征在于， 步 骤S2中， PCR反应体系50 μL， 体系中各组分为： 基因组DNA  100ng、 PCR  mix 25 μL、 上述上下游 引物各1 μL、 加ddH2O补至总体积50 μL； PCR的运行程序为： 94℃预变性3min； 94℃变性30s， 56 ℃退火30s， 72℃延伸3 0s， 35个循环； 72℃延伸10mi n； 4℃保存。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574593 A 2一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状筛选和猪育种中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及猪分子标记技术领域， 具体涉及一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状 筛选和猪选 育中的应用。 背景技术 [0002]猪的繁殖性状是种猪选育 的重要性状、 是衡量猪场经济效益的重要组成部分。 随 着产仔数性状的不断提高， 与泌乳力息息相关的乳头数性状越来越重要。 乳头数是离散的 可数性状， 受多基因共同调控， 其主效基因目前尚不明确。 因此， 寻找控制猪乳头数性状的 关键分子遗传标记， 并将其用于 分子标记辅助育种， 对提高猪的乳头数性状， 增加经济效益 具有重要意 义。 [0003]用于MAS的分子标记包括蛋白质标记， 微卫星标记， 单核苷酸多态性(single   nucleotide  polymorphi sm， SNP)标记等。 SNP标记指由基因组单核苷酸变异引起的DNA序列 多态性， 包括碱基转换、 颠换、 单碱基插入或缺失等， 被公认为是最新的第三代DNA分子标 记。 [0004]ENSSSCG00000002825基因(Carboxylesterase  1)编码一种重要的羧酸酯酶， 参与 大量外源物质以及具有酯、 硫酯或酰胺键的内源性底物的水解或酯交换。 大量研究表明， 该 基因在人体中与酯类代谢、 药物代谢过程相关， 并可能在血脑屏障中发挥作用； 而有关该基 因对乳头数性状的影响还未 见报道。 发明内容 [0005]本发明的目的在于克服上述技术不足， 提供了一种猪SNP分子标记在猪乳头数性 状筛选和猪育种中的应用， 本发明发掘了ENSSSCG00000002825基因第二内含子中一SNP与 猪乳头数性状关联， 可作为猪乳 头数性状筛 选和猪选 育的分子标记。 [0006]本发明的目的之一在于提供一种猪SNP分子标记在猪乳头数性状筛选和/或猪育 种中的应用， 其中所述乳头数性状为左侧乳头数性状、 右侧乳头数性状和总乳头数； 所述分 子标记的核苷酸序列如序列表SEQ  ID NO.1所示， 在该序列的第356bp处存在一处C>T碱基 突变。 该分子标记位于猪ENSSSCG00000002825基因第二内含子的部分序列中， 该序列长度 为417bp。 [0007]进一步的， 序列SEQ  ID NO.1中第356bp处的C或T碱基多态性位点， 表现为CC、 TC或 TT三种基因型， 其中T等 位基因具有更高的加性效应。 [0008]本发明的目的之二在于提供一种用于扩增上述分子标记的引 物对， 包括： 上游引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 [0009]本发明的目的之三在于提供一种上述引物对在猪乳头数性状筛选和/或猪育种中 的应用。 [0010]本发明的目的之四在于提供一种试剂盒， 包括上述引 物对， 其上游引 物的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.2所示， 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。说　明　书 1/4 页 3 CN 114574593 A 3