(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210089499.2 (22)申请日 2022.01.25 (71)申请人 河北省农林科 学院粮油作物研究所 地址 050035 河北省石家庄市高新区恒山 街162号 (72)发明人 王彦　田静　张志肖　范保杰　 刘长友　曹志敏　王珅　苏秋竹　 (74)专利代理 机构 北京科龙寰宇知识产权代理 有限责任公司 1 1139 代理人 马鑫 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) A01H 1/02(2006.01) (54)发明名称 与绿豆抗枯萎病主效QT L位点Fov2-1紧密连 锁的分子标记及应用 (57)摘要 本发明公开了一种 与绿豆抗枯萎病主效QTL 位点Fov2 ‑1紧密连锁的分子标记及应用， 属于绿 豆分子育种技术领域。 本发明以 “潍绿9002‑341” 和“V1128”形成F2:3分离群体为试验材料， 利用 SSR标记构建遗传连锁图谱， 并结合绿豆抗枯萎 病F2:3分离群体表型鉴定 结果在遗传连锁图的第 2连锁群检测到主效QTL位点Fov2 ‑1， 与该主效 QTL位点紧密连锁的SSR标记为Mchr4 ‑94和 Mchr4‑32， 标记之间的遗传距 离为1.89cM， LOD为 7.45， 表型贡献率为61.01％， 加性效应为 ‑ 21.28。 本发明所 获得的与绿豆抗枯萎病主效QT L 位点Fov2 ‑1紧密连锁的分子标记可用于绿豆抗 枯萎病早期选择， 对于提高抗枯萎病绿豆的育种 效率具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 114292953 A 2022.04.08 CN 114292953 A 1.与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧密连锁的SSR分子标记， 其特征在于， 所述的绿豆抗 枯萎病主效QTL位点命名为Fov2 ‑1， 位于第2连锁群Mchr4 ‑94～Mchr4 ‑32的标记区间内， 所 述的与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧密连锁的SSR分子标记为Mchr4 ‑94、 Mchr4 ‑32或其组 合， 其中SSR分子标记Mchr4 ‑94由引物Mchr4 ‑94F和引物Mchr4 ‑94R以绿豆基因组DNA为模板 通过PCR扩增得到， SSR分子标记Mchr4 ‑32由引物Mchr4 ‑32F和引物Mchr4 ‑32R以绿豆基因组 DNA为模板通过PCR扩增得到， 所述的引物序列如下： Mchr4‑94F： ACGTGTA ATCTGCTGTG GAT； Mchr4‑94R： CTCAGAT TGAATTTGCCTTC； 及/或 Mchr4‑32F： CGGAATTATCACCAACTCAT； Mchr4‑32R： TGAAGATCACCAGAGGATTT。 2.一种引物对， 其特征在于， 其为获得权利要1所述的与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧 密连锁的SSR分子标记的引物对； 所述的引物对为Mchr4 ‑94F/R、 Mchr4 ‑32F/R或其组合， 引 物序列如下 所示： Mchr4‑94F： ACGTGTA ATCTGCTGTG GAT； Mchr4‑94R： CTCAGAT TGAATTTGCCTTC； 及/或 Mchr4‑32F： CGGAATTATCACCAACTCAT； Mchr4‑32R： TGAAGATCACCAGAGGATTT。 3.权利要求1所述的与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧密连锁的SSR分子标记在 绿豆抗枯 萎病分子标记辅助选择育种中的应用。 4.权利要求2所述的引物对在绿豆抗 枯萎病分子标记辅助选择育种中的应用。 5.一种获得抗 枯萎病绿豆新品种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)以感枯萎病的绿豆资源V1128为母本， 抗枯萎病品种潍绿9002 ‑341为父本， 杂交获 得F1代， F1自交， 获得 F2:3分离群体； (2)采集两亲本及F2:3分离群体每个株系幼嫩的三出复叶置于2.0ml离心管内， 利用 CTAB法提取 所有样本基因 组DNA， 并利用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量， 备用； (3)分别以提取得到的样本基因组DNA为模板进行PCR扩增， 以获得与绿豆抗枯萎病主 效QTL位点Fov2 ‑1紧密连锁的SS R分子标记， 所使用的引物为Mchr4 ‑94F/R、 Mchr4 ‑32F/R或 其组合， 引物序列如下 所示： Mchr4‑94F： ACGTGTA ATCTGCTGTG GAT Mchr4‑94R： CTCAGAT TGAATTTGCCTTC Mchr4‑32F： CGGAATTATCACCAACTCAT Mchr4‑32R： TGAAGATCACCAGAGGATTT (4)根据扩增的结果判断每个株系的抗病情况， 若扩增结果与母本相同， 则抗枯萎表型 鉴定结果为高感； 若扩增结果与父本相同， 则抗枯萎表型鉴定结果为抗或高抗； 若扩增结果 表现为杂合型， 抗 枯萎表型鉴定结果 为中抗或 感。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292953 A 2与绿豆抗枯萎病主 效QTL位点Fov2 ‑1紧密连锁的分子标记及 应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧密连锁的分子标记及应用。 本发 明属于绿豆分子 育种技术领域。 背景技术 [0002]绿豆枯萎病是主要的土传病害， 严重发生时会导致巨大的经济损失。 防治枯萎病 最经济有效的方法就是培育和种植抗病品种， 而定位抗性基因是培养抗病品种的基础。 Yu 等通过“B2”与“835”杂交获得的包含354个株系的F2分离群体构建遗传图谱， 并将在连锁群 3(即5号染色体)上检测到的与萝卜抗枯萎病相关的Fwr1基因精细定位于5号染色体标记 FM82和FM87区间内， 标记间距离为139.8kb。 Branham等通过抗性甜瓜亲本USVL246 ‑FR2和 USVL114杂交获得的分离群体(F2:3和重组自交系)在9号染色体上定位到1个主效QTL位点。 Abdelraheem等利用棉花SNP63K芯片进行全基因组关联分析定位到13个与棉花抗枯萎4号 生理小种相关 的QTL位点。 李娜等以高抗枯萎病的栽培西瓜 ‘ZXG01478 ’和高感病的栽培西 瓜‘14CB11’为亲本构建的F2群体为试验材料， 检测到1个枯萎病抗性相关的主效QTL (fon1)。 [0003]目前， 国内外关于食用豆抗枯萎病的QTL研究未见报道。 本发明以抗豆象、 感枯萎 病的绿豆资源V1128和抗枯萎病品种潍绿9002 ‑341为亲本本构建的F2:3分离群体为试验材 料， 进行绿豆遗传连锁图谱构建和抗枯萎病QTL定位， 为绿豆抗枯萎病分子标记辅助育种和 基因克隆提供依据。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中的缺点， 通过构建绿豆遗传连锁图 谱， 筛选出1个抗枯萎病QTL位点以及与其紧密连锁的2个SSR标记， 该位点的效应值较高， 可 应用于绿豆抗 枯萎病分子标记辅助育种技 术中。 [0005]为了达到上述目的， 本发明采用的主 要技术方案包括： [0006]本发明提出的一种与绿豆抗枯萎病主效QTL位点紧密连锁的SSR分子标记， 所述的 绿豆抗枯萎病主效QTL位点命名为Fov2 ‑1， 位于第2连锁群Mchr4 ‑94～Mchr4 ‑32的标记区间 内， 与绿豆抗枯萎病主 效QTL位点Fov2 ‑1紧密连锁的SS R分子标记为Mchr4 ‑94、 Mchr4 ‑32或 其组合， 其中SSR分子标记Mchr4 ‑94由引物Mchr4 ‑94F和引物Mchr4 ‑94R以绿豆基因组DNA为 模板通过PCR扩增得到， SSR分子标记Mchr4 ‑32由引物Mchr4 ‑32F和引物Mchr4 ‑32R以绿豆基 因组DNA为模板通过PCR扩增得到， 所述的引物序列如下： [0007]Mchr4‑94F： ACGTGTA ATCTGCTGTG GAT； [0008]Mchr4‑94R： CTCAGAT TGAATTTGCCTTC； 及/或 [0009]Mchr4‑32F： CGGAATTATCACCAACTCAT； [0010]Mchr4‑32R： TGAAGATCACCAGAGGATTT。说　明　书 1/6 页 3 CN 114292953 A 3