(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210090300.8 (22)申请日 2022.01.25 (71)申请人 广西壮族自治区药用植物园 地址 530000 广西壮 族自治区南宁市 兴宁 区厢竹大道8 8号 (72)发明人 汤丹峰　韦范　缪剑华　全昌乾　 韦坤华　 (74)专利代理 机构 武汉蓝宝石专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 42242 专利代理师 方菲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴定仙草品种的EST-SSR分子标记、 试剂盒 及鉴定方法 (57)摘要 本发明提供一种提供鉴定仙草品种的EST ‑ SSR分子标记、 试剂盒及鉴定方法， 利用转录组数 据中的EST序列分析其所含微卫星重复序列的组 成和特征， 开发仙草EST ‑SSR引物， 并验证仙草 EST‑SSR引物有效性及其在仙草中的通用性， 以 期为仙草及其近缘属种的亲缘关系鉴定、 系统进 化、 遗传变异、 遗传图谱构建等研究提供重要的 工具和有价 值的信息 。 权利要求书2页 说明书23页 附图4页 CN 114507748 A 2022.05.17 CN 114507748 A 1.一种鉴定仙草品种的EST ‑SST分子标记， 其特征在于， 所述分子标记所针对 的SSR位 点包括TDF016位点、 TDF032位点、 TDF048位点、 TDF050位点、 TDF109位点、 TDF139位点、 TDF166位点、 TDF172位点及TDF191位点， 各位点核苷酸序列所包含的重复单元分别为(CCT) 5、 (CAA)5、 (CAA)6、 (ACC)7、 (TGA)8、 (TCA)7、 (CATC CTT)5、 (CAC)7及(G GT)5。 2.一种鉴定仙草品种的EST ‑SST分子标记引物组， 其特 征在于， 包括: 引物对1： GACCAACCAATCATGTTCCC和AAGAAGGTGTGGTTGTTGGC； 引物对2： TTAGATGTTCCTCGAACCCG和GCATC CCGACGTGATAGACT； 引物对3： GGAGCAATTCGCTTCAGTTC和CATGTAGC CGATCCCAATTT； 引物对4： AACTGAATCCCAATTGCAGC和TG GGAAGCTGTCA ACACTCA； 引物对5： GGACTGAAACTGGGAGTGGA和GATC CAGCTTCATGGGAAGA； 引物对6： TCCTCCGCTTTGTTCATTCT和AGGTTGCGTACATCTGAC CC； 引物对7： CCCTCAATTCATCCCTCTCA和AT TGATGAAGAGACTGCG GG； 引物对8： AGCATCCTGCGACTC CTAAA和CCGGAAATACGAATGCCTAA； 引物对9： GTGGAAAGGGTGGAGGATTT和TCCTCCTCCAGCACCACTAC。 3.一种鉴定仙草品种的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求2所述的EST ‑SST分子标记 引物组。 4.根据权利要求3所述的鉴定仙草品种的试剂盒， 其特征在于， 还包括DNA提取试剂、 DNA聚合酶预混液及电泳试剂中的至少一种。 5.一种鉴定仙草品种的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 提供待鉴定品种， 提取样品基因 组DNA； 采用权利 要求2所述的鉴定仙草品种的EST ‑SST分子标记引物组， 通过荧光PCR扩增， 得 扩增产物； 将所述扩增产物进行电泳检测荧 光PCR扩增条 带。 6.根据权利要求5所述的鉴定仙草品种的方法， 其特 征在于， 还 包括如下步骤： 再将扩增产物稀释， 加入 包含Liz 500内标的去离 子甲酰胺， 进行毛细管电泳检测； 将所述毛细管电泳检测结果进行峰图分析， 得到等位基因分型表及分型峰图， 编码形 成指纹图谱。 7.根据权利要求5或6所述的鉴定仙草品种的方法， 其特征在于， 所述荧光PCR的反应体 系为： 1 μL基因 组DNA， 0.3 μL上 下游引物， 5 μL  2×Taq PCR Master Mix， 超纯 水补足至10 μL。 8.根据权利要求7所述的鉴定仙 草品种的方法， 其特征在于， 所述荧光PCR的反应程序权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114507748 A 2为： 95℃预变性5min， 9 5℃变性30s， 62～ 52℃退火30s， 72℃延伸30s， 运行 10个循环， 9 5℃变 性30s， 52℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 运行25个 循环， 最后72℃延伸20mi n。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114507748 A 3