(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210085277.3 (22)申请日 2022.01.25 (71)申请人 成都仕康美生物科技有限公司 地址 610041 四川省成 都市高新区科园南 路88号9栋3层301号 (72)发明人 魏亮　 (74)专利代理 机构 成都市集智汇华知识产权代 理事务所(普通 合伙) 51237 代理人 沈璐蓓 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于评估实体器官移植状况的SNP标志物、 引物、 试剂盒及其使用方法 (57)摘要 本发明公开一种评估实体器官移植状况的 SNP标志物、 引物、 试剂盒及其使用方法， 所述SNP 标志物由供者和受者均是纯合子， 但基因型不同 的SNP位点组成； 通过对移植后受体总游离DNA的 特定SNP位点进行检测， 直接获得受体游离DNA中 供体游离DNA的含量， 即GcfDNA百分比， 根据 GcfDNA百分比快速而准确地判断移植排斥的程 度， 使得该试剂盒能够灵敏、 特异、 准确、 评估实 体器官移植情况， 无需进行创伤检测， 适用范围 广。 权利要求书4页 说明书15页 附图3页 CN 114317723 A 2022.04.12 CN 114317723 A 1.一种评估实体器官移植状况的SNP标记物， 其特征在于， 所述SNP标记物选自SNP位点 rs2074000、 rs179785、 rs1254968、 rs3736669、 rs470117、 rs3736729、 rs2326719、 rs3736861、 rs2147105、 rs3736908、 rs1887763、 rs3737035、 rs1984748、 rs856946、 rs1559803、 rs2114912、 r s857932、 rs284649、 r s947101、 rs615942、 r s2788888、 rs2004380、 rs2197076、 rs5 03821中的一种或多种。 2.一种评估实体器官移植状况的有效SNP位点的筛选方法， 其特征在于， 所述方法包 括： (1)收集实体 器官移植供者和受者的基因 组DNA； (2)使用SNP筛选用孔板， 供者样品孔加入qPCR反应液、 供者DNA、 水配置好 的mix， 受者 样品孔加 入qPCR反应液、 受者DNA、 水配置好的mix， 阳性对照孔加 入qPCR反应液、 阳性对照 DNA、 水配置好的mix， 阴性对照孔加入qPCR反应液、 水配置好的mix； (3)获取SNP标记 物单个SNP位 点基因分型 结果； (4)选择供者和受者均是纯合子的， 但基因型不同的SNP位点作为评估实体器官移植状 况的有效SNP位 点。 3.权利要求1所述SNP位 点在制备评估实体 器官移植状况的产品中的应用。 4.根据权利要求3所述应用， 其特征在于， 所述产品通过检测待测样品中的供者和受者 游离DNA中供体游离DNA含量 来评估实体 器官移植状况。 5.根据权利要求3所述应用， 其特征在于， 所述实体器官选自肾、 肝、 心脏、 肺中的一种 或多种； 评估肾移植损伤或排斥风险参考值为1％； GcfDNA百分比>1％为 高风险， 肾移植损伤或 排斥风险高； 肾移植损伤GcfDNA百分比<1％为低风险， 肾移植损伤或排斥风险低； 评估肝移植损伤或排斥风险参考值为10％； GcfDNA百分比>10％为 高风险， 存在肝移植 损伤或排斥风险高； 肝移植损伤GcfDNA百分比<10％为低风险， 肝移植损伤或排斥风险低； 评估心脏移植损伤 或排斥风险参考值为0.5％； GcfDNA百分比>0.5％为高风险， 存在心 脏移植损伤或排斥风险高； 心脏移植损伤GcfDNA百分比<0.5％为低风险， 心脏移植损伤或 排斥风险低； 评估肺移植损伤或排斥风险参考值为8％； GcfDNA百分比>8％为 高风险， 存在肺移植损 伤或排斥风险高； 肾移植损伤GcfDNA百分比<8％为低风险， 肺 移植损伤或排斥风险低。 6.一种用于 评估实体 器官移植状况的引物和探针， 其特 征在于， 所述引物选自用于检测SNP位点的引物中的一种或多种， 所述用于检测 SNP位点的引物 为： 用于检测rs20740 00的引物， 其序列为SEQ  ID No： 1和SEQ ID No： 2； 用于检测rs179785的引物， 其序列为SEQ  ID No： 3和SEQ ID No： 4； 用于检测rs1254968的引物， 其序列为SEQ  ID No： 5和SEQ ID No： 6； 用于检测rs373 6669的引物， 其序列为SEQ  ID No： 7和SEQ ID No： 8； 用于检测rs4701 17的引物， 其序列为SEQ  ID No： 9和SEQ ID No： 10； 用于检测rs373 6729的引物， 其序列为SEQ  ID No： 11和SEQ ID No： 12； 用于检测rs2326719的引物， 其序列为SEQ  ID No： 13和SEQ  ID No： 14； 用于检测rs373 6861的引物， 其序列为SEQ  ID No： 15和SEQ  ID No： 16；权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114317723 A 2用于检测rs214710 5的引物， 其序列为SEQ  ID No： 17和SEQ  ID No： 18； 用于检测rs373 6908的引物， 其序列为SEQ  ID No： 19和SEQ  ID No： 20； 用于检测rs18 87763的引物， 其序列为SEQ  ID No： 21和SEQ  ID No： 22； 用于检测rs37370 35的引物， 其序列为SEQ  ID No： 23和SEQ  ID No： 24； 用于检测rs1984748的引物， 其序列为SEQ  ID No： 25和SEQ  ID No： 26； 用于检测rs85 6946的引物， 其序列为SEQ  ID No： 27和SEQ  ID No： 28； 用于检测rs15 59803的引物， 其序列为SEQ  ID No： 29和SEQ ID No： 30； 用于检测rs21 14912的引物， 其序列为SEQ  ID No： 31和SEQ  ID No： 32； 用于检测rs857932的引物， 其序列为SEQ  ID No： 33和SEQ ID No： 34； 用于检测rs284649的引物， 其序列为SEQ  ID No： 35和SEQ ID No： 36； 用于检测rs947101的引物， 其序列为SEQ  ID No： 37和SEQ  ID No： 38； 用于检测rs615942的引物， 其序列为SEQ  ID No： 39和SEQ  ID No： 40； 用于检测rs278 8888的引物， 其序列为SEQ  ID No： 41和SEQ  ID No： 42； 用于检测rs20 04380的引物， 其序列为SEQ  ID No： 43和SEQ  ID No： 44； 用于检测rs2197076的引物， 其序列为SEQ  ID No： 45和SEQ  ID No： 46； 用于检测rs5 03821的引物， 其序列为SEQ  ID No： 47和SEQ  ID No： 48； 所述探针选自用于检测SNP位点的探针 中的一种或多种， 所述用于检测 SNP位点的探针 为： 用于检测rs20740 00的探针， 其序列为SEQ  ID No： 49和SEQ  ID No： 50； 用于检测rs179785的探针， 其序列为SEQ  ID No： 51和SEQ  ID No： 52； 用于检测rs1254968的探针， 其序列为SEQ  ID No： 53和SEQ ID No： 54； 用于检测rs373 6669的探针， 其序列为SEQ  ID No： 55和SEQ ID No： 56； 用于检测rs4701 17的探针， 其序列为SEQ  ID No： 57和SEQ  ID No： 58； 用于检测rs373 6729的探针， 其序列为SEQ  ID No： 59和SEQ  ID No： 60； 用于检测rs2326719的探针， 其序列为SEQ  ID No： 61和SEQ  ID No： 62； 用于检测rs373 6861的探针， 其序列为SEQ  ID No： 63和SEQ ID No： 64； 用于检测rs214710 5的探针， 其序列为SEQ  ID No： 65和SEQ ID No： 66； 用于检测rs373 6908的探针， 其序列为SEQ  ID No： 67和SEQ  ID No： 68； 用于检测rs18 87763的探针， 其序列为SEQ  ID No： 69和SEQ  ID No： 70； 用于检测rs37370 35的探针， 其序列为SEQ  ID No： 71和SEQ  ID No： 72； 用于检测rs1984748的探针， 其序列为SEQ  ID No： 73和SEQ  ID No： 74； 用于检测rs85 6946的探针， 其序列为SEQ  ID No： 75和SEQ  ID No： 76； 用于检测rs15 59803的探针， 其序列为SEQ  ID No： 77和S