(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210085425.1 (22)申请日 2022.01.25 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.23610 2021.10.15 (71)申请人 宁波市农业科 学研究院 地址 315040 浙江省宁波市 鄞州区德厚街 19号 (72)发明人 洪春桃　章建红　沈登锋　魏斌　 黄宗兴　蒋笑丽　 (74)专利代理 机构 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 专利代理师 何仲 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) A01N 63/20(2020.01) A01P 21/00(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种三叶青块 根内生菌及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种三叶青块根内生菌及其 应 用 ，特 点 是 该 菌 为 四 川 肠 杆 菌 6 D 1 （Enterobacter  sichuanensis  6D1） ， 于2021年 10月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会 普 通 微 生 物中 心 ， 保 藏 编号 为 C G M C C   No.23610， 具有产生长 素、 铁载体和溶磷特性， 在 促进三叶青块根发育方面、 提高药用植物总黄酮 含量方面、 提高三叶青根部脂氧化酶LOX基因表 达量方面和提高三叶青根部扩展蛋白Thexp基因 表达量方面的应用， 优点是促进三叶青块根生长 和提高总黄酮含量。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114480190 A 2022.05.13 CN 114480190 A 1.一种三叶青块根内生菌， 其特征在于该菌为四川肠杆菌6D1（ Enterobacter   sichuanensis  6D1） ， 于2021年10月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心， 保藏编号 为CGMCC No.23610。 2.一种根据权利要求1所述的三叶青块 根内生菌在制备吲哚乙酸 IAA方面的应用。 3.一种根据权利要求1所述的三叶青块 根内生菌在制备铁载体方面的应用。 4.一种根据权利要求1所述的三叶青块 根内生菌在促进三叶青块 根发育方面的应用。 5.一种根据权利要求1所述的三叶青块根内生菌在提高药用植物总黄酮含量方面的应 用。 6.一种根据权利要求1所述的三叶青块根内生菌在提高三叶青根部脂氧化酶LOX基因 表达量方面的应用。 7.根据权利要求6所述的一种三叶青块根内生菌在提高三叶青根部脂氧化酶LOX基因 表达量方面的应用， 其特征在于所述的三叶青根部脂氧化酶LOX基因的上下游扩增引物分 别为： 上游扩增引物L OX‑F： 5’ ‑ TCC TTC AAA GAT TCA AGC AAC A  ‑3’； 下游扩增引物L OX‑ R： 5’ ‑  AAT GGC TTC AAG AGT TCA TAT G‑3’。 8.一种根据权利要求1所述的三叶青块根内生菌在提高三叶青根部扩展蛋白Thexp基 因表达量方面的应用。 9.根据权利要求8所述的一种三叶青块根内生菌在提高扩展蛋白Thexp基因表达量方 面的应用， 其特征在于所述的三叶青根部扩展蛋白Thexp基因的上下游扩增引物分别为： 上 游扩增引物Thexp ‑F： 5’ ‑CCCTGGTAGATGGCGAACTT ‑3’； 下游扩增引物Thexp ‑R： 5’ ‑ AACCGCCACTAATTTCTGCC‑3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480190 A 2一种三叶青块根内生菌及其应用 技术领域 [0001]本发明属于植物益生菌制剂领域， 尤其涉及一种从中药三叶青块根中分离的肠杆 菌 （Enterobacter ） 在促进三叶青块 根生长和提高总黄酮含量中的应用。 背景技术 [0002]三叶青（ Tetrastigma  hemsleyanum ）为葡萄科（Vitaceae）崖爬藤属 （Tetrastigma ） 植物， 全株可入 药， 其中块根药效最佳， 具有清热解毒、 活血止痛和祛风化痰 等方面的功效。 现代药理学研究表明， 三叶青具有抗肿瘤、 抗病毒、 抗炎镇痛、 保肝等作用， 且长期应用未见毒副作用， 是西药无法代替的 “植物抗生素 ”。 临床上已广泛用于肝癌、 肺 癌、 白血病及艾滋病等疾病的治疗。 由于野生三叶青对生长环境要求比较苛刻， 其分布范围 较小， 且自然 条件下生长非常缓慢， 野生资源较少。 近些年， 因市场需求量不断增加， 野生资 源过度采挖， 生态环 境破坏严重， 三叶青 资源匮乏。 市场上三叶青价格不断攀升， 供不应求。 因此三叶青人工栽培技术迅速推广， 江浙地区种植面积大大增加。 由于三叶青栽培时间较 长， 一般需种植3 ‑5年才能采挖， 且采挖劳动力等 成本较大， 人工栽培产量较低， 因此需要进 一步优化人工栽培技 术， 提高三叶青 亩产量。 [0003]植物体内普遍存在着内生菌， 研究表明植物内生菌可以分泌生长素、 抗生素等代 谢物质， 这些代谢物质能促进植物生长或诱导植物产生抗性。 因此， 对植物施用植物内生菌 产生的生长素、 抗菌剂等， 可促进植物生长、 增强植物抗逆性， 还能减少化学药剂对环境的 污染， 保证植物的产量和品质。 因此研究能够促进三叶青生长内生菌， 是当前解决三叶青产 量低的有效途径之一。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种具有产生长素和溶磷特性的三叶青块根 内生菌及其在促进三叶青块 根生长和提高总黄酮含量中的应用。 [0005]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为： 一种三叶青块根内生菌， 该菌为 四川肠杆菌6D1 （ Enterobacter  sichuanen sis 6D1） ， 于2 021年10月15日保藏于中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物 中心， 保藏编号为CGMCC  No.23610。 该菌株为革兰氏阴性 菌， 在LB琼脂培养基上30℃培养24  h， 菌落表面光滑， 边缘整齐， 为乳白色； 采用Salkowski 溶液显色法和 铁载体检测 培养基 （CAS） 定性检测发现该菌株具有较强产IAA和 铁载体的能 力； 该菌株也具有较好的溶磷能力， 接种于蒙金娜固体培养基上， 置于30℃恒温培养箱培养 5 d后， 可形成透明圈。 [0006]上述三叶青块 根内生菌在制备吲哚乙酸 IAA方面的应用。 [0007]上述三叶青块 根内生菌在制备铁载体方面的应用。 [0008]上述三叶青块 根内生菌在提高土壤有效磷方面的应用。 [0009]上述三叶青块 根内生菌在促进三叶青块 根发育方面的应用。 [0010]上述三叶青块 根内生菌在提高药用植物总黄酮含量方面的应用。说　明　书 1/5 页 3 CN 114480190 A 3