(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210096154.X (22)申请日 2022.01.26 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.23243 2021.08.27 (71)申请人 中国科学院微生物研究所 地址 100000 北京市朝阳区北辰西路1号院 3号 (72)发明人 董彩虹　徐岩岩　 (74)专利代理 机构 北京众泽信达知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11701 代理人 张艳萍 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) A01N 63/30(2020.01) A01P 3/00(2006.01) A01G 18/00(2018.01) A01G 18/20(2018.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 滑子菇优良菌株及其特异性分子标记与应 用 (57)摘要 本发明公开了滑子菇优良菌株及其特异性 分子标记与应用。 该优良菌株为产量高、 出菇快 且抗病能力强的滑子菇682(保藏编号CGMCCNo: 23243)。 滑子菇682菌丝生长快， 后熟期短， 出菇 快， 菇蕾密集， 菇蕾成活率在80％以上， 菌盖浅黄 色至黄褐色， 适应能力强， 采收周期短； 生物转化 率高； 抗病原 菌能力强， 对哈茨木霉、 扩展青霉和 镰刀菌均有很强的拮抗能力。 本发 明通过野生标 本分离得到了滑子菇菌株682， 开发了食用菌新 品种， 并获得了滑子菇682的特异DNA序列和特有 的酶切位点， 对于保护该物种种质资源， 丰富食 用菌品种资源等具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图6页 CN 114350528 A 2022.04.15 CN 114350528 A 1.滑子菇(Pho liota microspora)682， 其特 征在于， 保藏编号 为CGMCC No:23243。 2.权利要求1所述滑子菇682的特异性DNA分子标记， 其特征在于， 核苷酸序列如SEQ  ID  NO:4所示。 3.用于检测权利要求1所述滑子菇682的PCR引物， 其特征在于， 包括如SEQ  ID NO:1所 示的上游引物和如SEQ  ID NO:2所示的下游引物。 4.权利要求1所述滑子菇682的检测方法， 其特征在于， 利用权利要求3所述引物进行检 测。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 提取待测滑子菇 的基因组 DNA作为模板， 利用上、 下游引物进行PCR扩增， 若扩增产物中包含SEQ  ID NO:4所示的特异 性DNA分子标记， 或扩增产物具有特有的XbaI酶切位 点， 则判定待测滑子菇为滑子菇682。 6.权利要求1所述滑子菇682在抗病原菌以及由病原菌导 致的植物病害中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述病原菌包括哈茨木霉(Trichoderma   harzianum)、 扩展青 霉(Penicillium expansum)和镰刀菌(Fusarium  sp.)。 8.权利要求1所述滑子菇682作为亲本在进行杂交育种 、 基因改造中的应用。 9.权利要求1所述滑子菇682的栽培方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)滑子菇682菌株母种扩繁： 将滑子菇682菌株接种于母种培养基上， 在温度为18 ‑25 ℃， 黑暗条件下培 养10‑15天， 得到滑子菇682菌株母种； 其中所述母种培 养基为PDA培养基； (2)滑子菇682菌株原种扩繁： 将步骤(1 )中所得的滑子菇682母种接种到原种培养基 上， 在温度为18 ‑25℃， 黑暗条件下培养20 ‑30天， 得到滑子菇682原种； 其中所述原种培养基 的原料组成为： 麦粒93％、 牛粪5％、 石 膏1％、 碳 酸钙0.9％和石灰0.1％， 含水量5 0％‑60％； (3)滑子菇682菌株栽培种制备： 将步骤(2)中所得的滑子菇682原种接种到栽培种培养 基上， 在温度为20 ‑23℃、 黑暗条件 下培养20 ‑30天， 得滑子菇682栽培种； 其中所述栽培种培 养基的原料组成为： 杂木屑80％、 麸皮18％和石 膏2％， 含水量5 0％‑60％； (4)栽培： 在温度为15 ‑25℃， 避光条件下后熟10 ‑30天； 后熟好的菌袋均匀摆放在层架 或者地面上， 割开菌袋两端， 培养8 ‑10天， 每天雾化喷水3 ‑4次； 昼夜温差在5 ‑15℃， 经3 ‑5 天， 料面便形成浅黄色米粒状原基， 室内温度为5 ‑30℃、 空气相对湿度为85 ‑90％， 少量的散 射光条件 下培养2‑3天， 形成浅黄色幼蕾； 经5 ‑7天， 菇蕾长至菌盖直径大小为2c m， 喷水减少 至每天喷1 ‑2次， 空间喷雾化水， 空间相对湿度在85 ‑90％； 在菌盖直径达1.5 ‑3.5cm且菌幕 未开伞时采摘。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350528 A 2滑子菇优良菌株及其特异性分子标记与应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 具体地说， 涉及滑子菇优良菌株及其特异性分子标 记与应用。 背景技术 [0002]滑子菇(Pholiota  microspora)属于真菌界、 担子菌门、 伞菌纲、 伞菌目、 球盖菇 科、 鳞伞属。 别名滑菇、 珍珠菇、 珍珠蘑、 滑子蘑、 光帽鳞伞。 滑子菇具有极高的食用和营养价 值， 其中含有丰富的营养物质， 如粗蛋白、 粗纤维、 多糖、 脂肪、 矿物质、 灰分、 维生素等， 具有 抗肿瘤、 抗氧化和增强免疫力等作用。 滑子菇是世界菇类交易市场的十大菇类之一， 也是联 合国粮农组织(FAO)向发展中国家推荐栽培的食用菌种类之一。 滑子菇颜色艳丽、 菇肉脆 嫩、 味道鲜美， 具有滑、 鲜、 嫩、 脆的特点， 营养十分丰富， 是汤料的美好添加品， 颇受人们欢 迎， 而且菇盖表面分泌的粘状物， 具有抑制肿瘤的功效， 能提高机体免疫力， 对增进人体的 脑力和体质大有益处， 是一种低热量、 低脂肪的保健食品。 [0003]目前国内滑子菇主产区的品种主要为早丰112和C3， 多年来菌种一直未有更新， 而 且原有菌种 逐渐老化， 出菇能力减弱， 菇蕾数在逐渐减少。 滑子菇虽然易于栽培， 但其菌种 老化问题尚未 得到妥善解决， 亟需对其进行菌种改良， 促进滑子菇产业的发展。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供滑子菇优良菌株及其特异性分子标记与应用。 [0005]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供一种滑子菇(Pholiota  microspora) 682， 菌株682是从采自西藏墨脱的野生滑子菇子实体通过分离纯化、 驯化培养获得的产量 高、 抗病能力强的滑子菇菌株。 菌株682现已保藏于中 国微生物菌种保藏管 理委员会普通微 生物中心， 地址北京市朝 阳区北辰西路1号院3号， 中国科学院微生物研究所， 邮编100101， 保藏编号CGM CC No:23243， 保藏日期2021年8月27日。 [0006]第二方面， 本发明提供滑子菇682的特异性DNA分子标记， 核苷酸序列如SEQ  ID  NO:4所示。 [0007]第三方面， 本发明提供用于检测滑子菇682的PCR引物， 包括如SEQ  ID NO:1所示的 上游引物和如SEQ  ID NO:2所示的下游引物。 [0008]第四方面， 本发明提供滑子菇682的检测方法， 利用引物对SEQ  ID NO:1和SEQ  ID  NO:2进行检测； 利用XbaI对滑子菇682的特异性DNA分子序列进行酶切。 [0009]所述方法包括： 提取待测滑子菇的基因组D NA作为模板， 利用上、 下游引物进行PC R 扩增， 若扩增产物中包含SEQ  ID NO:4所示的特异性DNA分子标记以及特异性DNA分子标记 上特有的酶切位 点则判定待测滑子菇为滑子菇682。 [0010]第五方面， 本发明提供滑子菇682在抗病原菌以及由病原菌导致的植物病害中的 应用。 [0011]所述病原菌包括但不限于哈茨木霉(Trichoderma  harzianum)、 扩展青霉说　明　书 1/6 页 3 CN 114350528 A 3