(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210094440.2 (22)申请日 2022.01.26 (71)申请人 杭州医学院 地址 310000 浙江省杭州市滨江区滨 文路 481号 (72)发明人 陈林洁　吕建新　方权　王震　 金大智　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 代理人 许佳 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测新型冠状病毒Omicron突变株 的试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测新型冠状病毒 Omicron突变株的试剂盒， 属于病毒检测领域。 本 发明公开了用于检测新型冠状病毒Omicron突变 株的引物组和分子信标， 引物组包括新型冠状病 毒S蛋白Omicron突变株特异性识别引物对和稳 定引物， 该引物组可以特异性扩增出S蛋白 Omicron突变株片段； 同时在引物对界定的扩增 子区域内设计特异性识别分子信标， 用于检测 PCR扩增产物； 本发明提供了基于Omicron突变株 特异性突变位点的PCR技术和分子信标杂交检测 Omicron突变株的引物组和分子信标， 并构建了 试剂盒和检测方法， 具有灵敏度高， 识别能力强， 操作方便、 检测速度快、 结果准确等优点， 适用于 临床中大规模应用。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图4页 CN 114317831 A 2022.04.12 CN 114317831 A 1.一种用于检测新型冠状病毒Omicron突变株的引物组和分子信标， 其特征在于， 所述 引物组包括： NL211‑212I INS214EPE_F:T TATAGTGCGTGAGC CAGAAGAT； NL211‑212I INS214EPE_R:GCTGTC CAACCTGAAGAAG； NL211‑212I INS214EPE_stable:CTCAG GGTTTTTCGGCTTTAGAAC； S371LS373P S375F_F:CTATATA ATCTCGCAC CATTTTTC； S371LS373P S375F_R:CTGACT TCATCACCTCTAAT； S371LS373P S375F_stable:A AGTGTTATGGAGTGTCTC CTACT； Q493RG496SQ 498R_F:CT TTACGATCATATAGT TTTCG； Q493RG496SQ 498R_R:TG GTGCATGTAGA AGTTC； 所述分子信标包括： NL211‑212I INS214EPE_B:cgcac cGGTAGATTTGCCAATAGGTATTAACATCACTAG Gggtgcg； S371LS373P S375F_B:cgcac cGATCTCTGCT TTACTAATGTCTATGCAGAT TCggtgcg； Q493RG496SQ 498R_B:cgcac cGGTGTTGGTCACCAACCATACAGAGg gtgcg。 2.一种用于检测新型冠状病毒Omicron突变株的产品， 其特征在于， 包括权利要求1所 述的引物组和分子信标。 3.如权利要求2所述的产品， 其特 征在于， 所述产品包括试剂盒、 试剂或检测芯片。 4.利用权利要求1所述的引物组和分子信标制备检测新型冠状病毒Omicron突变株的 产品中的应用。 5.如权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述产品包括药物、 试剂盒、 试剂或芯片。 6.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 以待侧的样品的DNA为模板， 通过所述引物组 扩增所述DNA， 以及所述分子信标杂交检测扩增产 物， 进而判定待检测的样品是否为新型冠 状病毒Omicron突变株。 7.如权利要求6所述的应用， 其特征在于， 扩增体系包括以下组分： HotStart  Taq DNA 聚合酶0.4 μL， 5 ×反应缓冲液4 μL， dNTP混合液 1 μL， 引物F  0.4 μL， 引物R  0.4 μL， 引物stable   0.4 μL， 分子信标引物0.2 μL， 模板DNA  1 μL， 无酶水12.2 μL。 8.如权利要求6所述的应用， 其特征在于， 扩增程序为： 95℃3min预变性； 95℃变性5s， 60℃退火延伸3 0s， 并采集 荧光信号， 循环45次。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317831 A 2一种用于 检测新型冠状病毒Omicron突变株的试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及病毒检测领域， 特别是涉及一种用于检测新型冠状病毒  Omicron突变 株的试剂盒。 背景技术 [0002]Omicron突变毒株与野生型病毒相比， 具有更高的传播能力和感染能力以及带来 了临床特征的变化。 这些变化同时也给现行的诊断、 治疗和疫苗带来了新的挑战。 因此， 对 新型冠状病毒S蛋白编码基因型 的快速鉴定不仅有利于临床的诊断和治疗， 更有利于对疫 情的防控。 [0003]目前用于新型冠状病毒突变株鉴定的方法主要是DNA测序技术。 然而该方法具有 明显的不 足之处： DNA测序技术虽然准确， 但是耗时过长、 花费高， 并不适用于快速检测的要 求。 临床上迫切需要一种准确的、 灵敏度高的、 操作简便的新型冠状病毒突变株的检测手 段。 ARMS‑PCR(突变扩增系统)是在基础性PCR技术上发展起来的新技术， 其基本设计思路是 将特异性突变位点置于引物的3 ’端， 而不是中间位置， 再利用耐热Taq  DNA 聚合酶缺乏3 ’ →5’核酸外切酶活性的特性， 引物与模板互补配对过程中， 若3 ’端碱基对形成错配， 链延伸 反应就会因3 ′,5′ ‑磷酸二酯 键形成障碍而受阻， 其扩增结果为： 野生型模板扩增受阻， 而突 变型模板产 物放大， 因而可用于SNP分型检测。 鉴于目前新型冠状病毒Omicr on的存在， 提供 一种快速、 准确、 灵敏度高的新型 冠状病毒突变 株鉴定方法非常必要。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种用于检测新型冠状病毒Omicron突变株的试剂盒， 以解 决上述现有技术存在的问题， 该试剂盒包括3对新型冠状病毒  S蛋白Omicr on突变株特异性 识别引物和分子信标， 本发明基于P CR技术和分子信标杂交检测新冠病毒突变株， 不仅灵敏 度高， 识别能力强， 还具有操作方便、 检测速度快、 结果准确等优点， 适用于临床中大规模应 用。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0006]本发明提供一种用于检测新型冠状病毒Omicron突变株的引物组和分子信标， 所 述引物组包括： [0007]NL211‑212I INS214EPE_F:T TATAGTGCGTGAGC CAGAAGAT； [0008]NL211‑212I INS214EPE_R:GCTGTC CAACCTGAAGAAG； [0009]NL211‑212I INS214EPE_stable:CTCAG GGTTTTTCGGCTTTAGAAC； [0010]S371LS373P S375F_F:CTATATA ATCTCGCAC CATTTTTC； [0011]S371LS373P S375F_R:CTGACT TCATCACCTCTAAT； [0012]S371LS373P S375F_stable:A AGTGTTATGGAGTGTCTC CTACT； [0013]Q493RG496SQ 498R_F:CT TTACGATCATATAGT TTTCG； [0014]Q493RG496SQ 498R_R:TG GTGCATGTAGA AGTTC；说　明　书 1/6 页 3 CN 114317831 A 3