(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210093255.1 (22)申请日 2022.01.26 (71)申请人 河南农业大 学 地址 450046 河南省郑州市龙子湖高校园 区15号 (72)发明人 张坤普　王道文　张紫薇　师翠兰　 李峰　靳怀冰　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 小麦谷蛋白大聚体含量主效基因位点 TaIGC-7B的分子标记引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了小麦谷蛋白大聚体含量主效 基因位点TaI GC‑7B的分子 标记引物及其应用。 具 体地公开了与谷蛋白大聚体含 量相关的Indel 分 子标记和/或检测所述分子标记的物质在鉴定或 辅助鉴定小麦谷蛋白大聚体含量中的应用。 本发 明设计了 该分子标记的引物， 并提供一种鉴定小 麦谷蛋白大聚体含量的方法。 本发 明的分子标记 及其引物和方法具有特异性强、 扩增DNA片段单 一的特点， 检测方便， 在小麦的各个组织及发育 阶段均可检测到， 可 以在小麦的苗期筛选， 节约 育种成本， 提高品种品质改良的选择效率， 加快 小麦选择育种进程。 本发明分子标记是根据 Indel开发的共显性标记， 可以减少分子标记辅 助选择时的连锁累赘， 具有重大的应用价 值。 权利要求书1页 说明书12页 序列表1页 附图2页 CN 114410823 A 2022.04.29 CN 114410823 A 1.分子标记和/或检测所述分子标记的物质在鉴定或辅助鉴定小麦谷 蛋白大聚体含量 中的应用， 其特 征在于， 所述分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述物质含有扩增包含权利要求1中所述 分子标记在内的小麦基因 组DNA片段的PCR引物。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述PCR引物为引物对， 所述引物对由正向 引物和反向引物组成， 所述正向引物为核苷酸序列是SEQ  ID No.2的单链DNA， 所述反向引 物为核苷酸序列是SEQ  ID No.3的单链DNA。 4.权利要求1中所述的分子标记， 和/或， 权利要求3中所述的引物对。 5.含有权利要求3中所述引物对的试剂或试剂盒。 6.一种鉴定或辅助鉴定小麦谷蛋白大聚体含量的方法， 其特征在于， 所述方法包括以 下步骤： A1)以待鉴定小麦基因组DNA为模板， 利用权利要求3中所述引物对进行PCR扩增， 得到 PCR产物； A2)根据所述PCR产物来 鉴定小麦 谷蛋白大聚体含量。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 根据所述PCR产物来鉴定小麦谷蛋白大聚 体含量为： 所述P CR产物含有权利要求 1中所述分子标记的所述待鉴定小麦的谷蛋白大聚体 含量高于所述PCR产物不含有权利要求1中所述分子标记的所述待鉴定小麦 。 8.权利要求5所述的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定小麦谷蛋白大聚体含量中的应 用。 9.权利要求1中所述的分子标记， 和/或， 权利要求3中所述的引物对， 和/或， 权利要求5 所述的试剂或试剂盒在小麦种质资源分析和鉴定和/或分子 辅助遗传育种中的应用。 10.扩增权利要求1中所述的分子标记的引物对。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114410823 A 2小麦谷蛋白大聚体 含量主效基因位点TaIGC ‑7B的分子标记引 物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记辅助育种技术领域， 具体涉及小麦谷蛋白大聚体含量主效基 因位点TaIGC‑7B的分子标记引物及其应用。 背景技术 [0002]小麦(Triticum  aestivum L.)是我国最主要的粮食作 物之一， 其产量和消费量均 居世界首位。 小麦面粉加水后具有 特殊的制面特性， 面团 既具有弹性又具有延展性， 可以被 用来加工成各种食品， 如面包、 面条、 馒头、 饼干和糕点。 目前的研究已表明： 小麦籽粒中蛋 白的含量及其组成对品质有着非常重要的影响。 小麦籽粒蛋白主要包括两部分： 与代谢相 关的清蛋白和球蛋白， 与品质密切相关的面筋蛋白。 近年来， 随着经济的发展和人们生活水 平的提高， 人们对于优质食品和营养健康的需求将会越来越高， 因此提高小麦品质是当前 小麦遗传改良的重要目标。 [0003]小麦面筋蛋白根据分子量大小主要分为高分子量麦谷蛋白(High  Molecular   Weight Glutenin  Subunits， HMW ‑GSs)、 低分子量麦谷蛋白(Low  Molecular  Weight  Glutenin  Subunits， LMW ‑GSs)和醇溶蛋白(Gliadins)， 它们分别占到小麦总面粉蛋白的 7.5％、 32.5％、 40.0％。 面团的形成实质上是小麦粉中的面筋蛋白吸水形成面筋网络结构 的过程。 在小麦成熟籽粒中， HMW ‑GSs和LMW ‑GSs通过分子间二硫键形成谷蛋白大聚体 (Glutenin  macropolymer， GMP)， 极少部分醇溶蛋白也参与GMP的形成。 GMP是分子量很大的 聚合体蛋白， 在面筋网络结构的形成过程中发挥重要作用， 进而影响面团的弹性和延展性。 根据谷蛋白在正丙醇溶液中的溶解性， 把易溶于50％正丙醇溶液而不溶于70％正丙醇溶液 的这部分谷蛋 白称为可溶性谷蛋 白(Solub le glutenin， SG)， 把不溶于50％正丙醇溶液而 溶于含1％二硫苏糖醇(DTT)的50％正丙醇溶液部分叫做不溶性谷蛋白(Insoluble   glutenin， IG)， 这部分不溶性谷蛋白主要为聚合体蛋白。 研究表明IG的含量(Insoluble   glutenin  content， IGC)与面筋和面团强度及面团加工品质参数显著相 关， 能够解释83 ‑ 95％的面团流变学参数变异和74％的面包体积变异(Bean  S,Lyne R,Tilley  K,et al.A  rapid method for quantitation  of insoluble  polymeric  proteins  in flour.Cereal   Chemistry,1998,75(3):374 ‑379； Sapirstein  H,Fu B.Intercultivar  variation  in the  quantity  of monomeric  proteins,soluble  and insoluble  glutenin,and  residue  protein in wheat flour and relationships  to breadmaking  quality.Cereal   Chemistry,1998,75(4):500 ‑507.)。 IG提取方法简单， 需要的面粉量很少(100 μg)， 并且能 够利用分光光度计进行高通量的蛋白定量， 是研究谷蛋白大聚体的合适指标， 可用于小麦 早代品质性状的评价。 [0004]IGC是典型的数量性状， 受基因型、 环境以及 基因型和环境互作的影响。 当前， 利用 IGC指标来评价面团指标的实践报道很少。 Hu等(2007)分析了25份中国小麦材料中不同类 型蛋白含量(单体蛋白、 可溶性蛋白及不溶性蛋白)对白盐面条加工特性的影响， 研究发现说　明　书 1/12 页 3 CN 114410823 A 3