(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210095159.0 (22)申请日 2022.01.26 (71)申请人 浙江省淡水 水产研究所 地址 313001 浙江省湖州市杭长桥 南路999 号 (72)发明人 郑建波　贾永义　顾志敏　迟美丽　 程顺　李飞　刘士力　刘一诺　 (74)专利代理 机构 青岛联智专利商标事务所有 限公司 37101 专利代理师 宋莲英 (51)Int.Cl. C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记及其 所用引物对和应用 (57)摘要 本发明提出了一种鉴定红螯螯虾遗传性别 的SNP标记及其所用引物对和应用。 本发明SNP标 记的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， SNP标记的 核苷酸序列中第229bp碱基位置表现为TG杂合的 是雌性个体， SNP标记的核苷酸序列中第229bp碱 基位置表现为TT纯合的是雄性个体； 本发明还 给 出了上述SNP标记所用的引物对， 并给出了上述 SNP标记在鉴定红螯螯虾遗传性别中的应用。 本 发明的SNP标记是与遗传性别相关的SNP标记， 通 过SNP标记可以成功鉴定红螯螯虾的遗传性别， SNP标记在鉴定雄性红螯螯虾时的成功率超过 90％， 在鉴定雌性红螯螯虾时的成功率超过 80％， 从而指导红螯螯虾的育种和养殖， 提高经 济收益。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图1页 CN 114480602 A 2022.05.13 CN 114480602 A 1.一种鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记， 其特 征在于： 所述SNP标记的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 所述SNP标记的核苷酸序列中第229bp 碱基位置表现为TG杂合的是雌性个体， 所述SNP标记的核苷 酸序列中第229b p碱基位置表现 为TT纯合的是雄 性个体。 2.一种用于检测根据权利要求1所述的鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记的引物对， 其 特征在于， 所述引物对的核苷酸序列为： Fst2‑F： 5’ ‑TCAGTGCTCTAGTGTC CAACAAGG‑3’； Fst2‑R： 5’ ‑TGACTAAAACAATACACAGATA AC‑3’。 3.一种根据权利要求1所述的鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记的应用， 其特 征在于： 所述SNP标记在用于鉴定红螯 螯虾遗传性别中的应用。 4.根据权利要求3所述的鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记的应用， 其特征在于， 所述 SNP标记鉴定红螯 螯虾遗传性别的步骤为： 红螯螯虾提取DNA后， 使用根据权利要求2所述的用于检测鉴定红螯螯虾遗传性别的 SNP标记的引物对进行PCR扩增， 获得SNP标记； 对SNP标记进行测序和序列比对分析， 所述 SNP标记的核苷酸序列中第229bp碱基位置表现为TG杂合的是雌性个体， 所述SNP标记的核 苷酸序列中第2 29bp碱基位置表现为T T纯合的是雄 性个体。 5.根据权利要求 4所述的鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记的应用， 其特 征在于： 所述测序是Sanger测序。 6.根据权利要求 4所述的鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记的应用， 其特 征在于： 所述序列比对分析时使用的是SeqMan软件。 7.根据权利要求 4所述的鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记的应用， 其特 征在于： 所述PCR扩增反应的程序为： 98℃， 预变性5min； 98℃， 变性5s， 55℃， 退火5s， 72℃， 延伸 20s， 重复40个 循环； 最后， 72℃， 延伸1mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480602 A 2一种鉴定红螯 螯虾遗传性别的SNP标记及其所用引物对和 应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学的技术领域， 特别是指一种鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP 标记及其所用引物对和应用。 背景技术 [0002]红螯螯虾(Cherax  quadricarinatus)， 俗称澳洲淡水龙虾， 原产于澳大利亚北部 和新几内亚南部， 隶属于拟螯虾科， 光壳虾属， 具有生长快、 抗逆强、 肉质细嫩、 出肉率高等 特点， 被认为是具有重要经济价值的世界名贵淡水虾之一。 两性成熟 的红螯螯虾具有明显 的性别二态性特征， 一方面， 雄虾在生长速度和 个体大小上优于雌虾； 另一方面， 与其它经 济养殖虾相比， 红螯螯虾抱卵量较少(300 ‑700颗/尾)， 规模化繁育中雌雄配比高于3:1， 为 此在生产上需要更多的雌虾来满足养殖户对苗种的需求。 然而， 目前还没有可以高效的对 红螯螯虾的性别进行控制的技 术。 [0003]遗传标记是指用来区分不 同的个体或群体并且能够稳定遗传的物质或性状。 SNP (单核苷酸多态性， single  nucleotide  polymorphism)是指基因组特定位置 上一个碱基的 变异， 且任一种等位基因在种群中的发生频率高于1％， 变异的形式包括转换、 颠换、 插入/ 缺失等。 SNP作为第三代分子标记因其具有数量巨大、 分布广泛、 共显性、 高度稳定、 易于自 动化规模分析、 能够显示其它技术无法检测的隐藏多态性、 可能与基因功能相关的众多优 点， 在分子标记辅助育种中得到广泛应用。 [0004]目前， 现有技术中没有关于红螯螯虾性别遗传标记的研究或报道。 因此， 开发与红 螯螯虾性别鉴定相关的遗传标记， 实施和发展红螯螯虾全雄或全雌育种， 可以实现红螯螯 虾的单性养殖， 提高养殖户的经济收益， 对红螯 螯虾的育种和养殖 具有重要的意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记及其所用 引物对和应 用， 旨在解决现有技术无法对红螯螯虾的性别进 行控制从而导致无法实现红螯螯虾的单性 育种， 进而影响了红螯 螯虾的育种 、 养殖以及养殖户的经济收益 等问题。 [0006]为了解决上述 技术问题， 本发明的技 术方案是这样实现的： [0007]在一个方面， 本发明的一种鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记， 所述SNP标记的核 苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 所述SNP标记的核苷酸序列中第229bp碱基位置表现为TG杂 合的是雌性个体， 所述SNP标记的核苷 酸序列中第229b p碱基位置表现为TT 纯合的是雄性个 体。 [0008]本发明的SNP标记是与遗传性别相关的SNP标记， 通过SNP标记可以成功鉴定红螯 螯虾的遗传性别， 为后续单性育种 过程中性逆转个体的鉴定提供理论依据； 其中， SNP标记 在鉴定雄性红螯螯虾时的成功率超过90％， 在鉴定雌性红螯螯虾时的成功率超过80％， 能 够作为红螯螯虾遗产性别鉴定的分子标记， 从而指导红螯螯虾的育种和养殖， 实现红螯螯说　明　书 1/10 页 3 CN 114480602 A 3