(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210088334.3 (22)申请日 2022.01.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114107572 A (43)申请公布日 2022.03.01 (73)专利权人 潮州凯普生物化学有限公司 地址 521000 广东省潮州市经济开发试验 区北片高新区D5 -3-3-4 专利权人 广东凯普生物科技股份有限公司 　 广州凯普医药 科技有限公司 (72)发明人 卢晓丹　李烈军　石琳　肖新换　 陈灿钿　吴钰熙　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 代理人 薛红凡 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)(56)对比文件 CN 113957176 A,202 2.01.21 CN 113897460 A,2022.01.07 CN 113215313 A,2021.08.0 6 CN 113278733 A,2021.08.20 CN 113817868 A,2021.12.21 CN 113846185 A,2021.12.28 CN 113073150 A,2021.07.0 6 WO 2021176099 A1,2021.09.10 CN 112760414 A,2021.0 5.07 郭永豪等.新型 冠状病毒 谱系分类及基因 组 核酸变异. 《河南预防医学杂志》 .2021,第32卷 (第3期),第161-16 5页. (续) 审查员 徐丹 (54)发明名称 一种基于多重PCR技术检测不同新冠病毒突 变株的引物探 针组、 检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种基于多重PCR技术检测不 同新冠病毒突变株的引物探针组、 检测试剂盒及 其应用， 属于病毒检测技术领域。 本发明下载14 种新冠病毒突变株序列， 确定有检测意义的新冠 病毒S蛋白突变位点和保守序列， 设计多重扩增 引物， 经单管多重PCR扩增， 扩增产物与探针杂 交， 根据新冠病毒保守序列检测结果判断被检样 本是否含有新型冠状病毒检测， 根据S蛋白突变 位点检测结果判断为新型冠状病毒突变株。 本发 明检测范围广、 特异性强、 检测灵敏度高、 抗干扰 能力强， 且能有效评估受检者感染的SARS ‑CoV‑2 的传播性、 致病性以及是否对疫苗有免疫逃逸， 也有助于分析研究SARS ‑CoV‑2的变异规律， 启发 控制流行和预防再流行的新思路。 [转续页] 权利要求书2页 说明书13页 序列表6页 附图10页 CN 114107572 B 2022.04.12 CN 114107572 B (56)对比文件 Hui Xi等.Multiplex Bi osensing for Simultaneous Detecti on of Mutati ons in SARS-CoV-2. 《ACS O mega》 .2021,第6卷(第40 期),第25846 -25859页. Saman Fatihi 等.A rigorous framew ork for detecti ng SARS- CoV-2 spi ke protei n mutational ensemble from gen omic and structural features. 《Cur rent Researc h in Structural Bi ology》 .2021,第3卷第2 90-300页. Francesco Dami n等.CovidAr ray: A Microarray-Based As say with High Sensitivity. 《Sensors》 .2021,第21卷(第7期), 第1-13页. Ryota Shimada等.SARS- CoV-2 Variant Identificati on Using a Gen ome Tiling Array and Gen otyping Probes. 《bi oRxiv》 .2021,443659.2/2 页 2[接上页] CN 114107572 B1.一种基于多重PCR技术检测不同新冠病 毒突变株的引物探针组， 其特征在于， 包括检 测新冠病毒保守序列的引物探针组和检测新冠病毒突变 株S基因突变位 点的引物探针组； 所述新冠病毒突变株S基因突变位点包括S基因HV69 ‑70del位点、 S基因N501Y位点、 S基 因D614G位点、 S基因E484K位点、 S基因E484Q位点、 S基因K417N位点、 S基因K417T 位点、 S基因 L452R位点、 S基因T478K位 点、 S基因P681H位 点、 S基因P681 R位点； 检测S基因HV69 ‑70del位点 的引物包括核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示 的正向引物和 核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示的反向引物； 检测S基因N501Y位点、 S基因E484K/Q位点、 S基因K417N/T位点、 S基因L452R位点和S基 因T478K位点的引物包括核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ   ID NO:4所示的反向引物； 检测S基因D614G位点和S基 因P681H/R位点的引物包括核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所示 的正向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示的反向引物； 检测新冠病毒野生株S基因HV69 ‑70del位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:7所示； 检测新冠病毒突变 株S基因HV69 ‑70del位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示； 检测新冠病毒野生株S基因N5 01Y位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:9所示； 检测新冠病毒突变 株S基因N5 01Y位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所示； 检测新冠病毒野生株S基因E484K或E484Q位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:11所 示； 检测新冠病毒突变 株S基因E484K位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示； 检测新冠病毒突变 株S基因E484 Q位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:13所示； 检测新冠病毒野生株S基因K417N或K417T位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:14所 示； 检测新冠病毒突变 株S基因K417N 位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:15所示； 检测新冠病毒突变 株S基因K417T位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:16所示； 检测新冠病毒野生株S基因L 452R位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:17所示； 检测新冠病毒突变 株S基因L 452R位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:18所示； 检测新冠病毒野生株S基因T478K位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:19所示； 检测新冠病毒突变 株S基因T478K位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:20所示； 检测新冠病毒野生株S基因D614G位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:21所示； 检测新冠病毒突变 株S基因D614G位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:22所示； 检测新冠病毒野生株S基因P681H或P681R位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:23所 示； 检测新冠病毒突变 株S基因P681H位 点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:24所示； 检测新冠病毒突变 株S基因P681 R位点的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:25所示。 2.根据权利要求1所述引物探针组， 其特征在于， 检测新冠病 毒保守序列的引物探针组 包括检测N基因保守序列的引物探针组、 检测ORF1ab基因保守序列的引物探针组； 所述检测N基因保守序列的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ  ID NO:26所示的正向引 物、 核苷酸序列如SEQ  ID NO:27所示的反向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO:28所示的探 针；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114107572 B 3