(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210099646.4 (22)申请日 2022.01.27 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114457150 A (43)申请公布日 2022.05.10 (73)专利权人 宁波大学附属人民医院 地址 315040 浙江省宁波市 鄞州区百丈东 路251号 (72)发明人 何恒倩　忻双华　沈鹏　陆勤康　 (74)专利代理 机构 北京天盾知识产权代理有限 公司 11421 专利代理师 丁敬博 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A61K 45/00(2006.01) A61P 27/02(2006.01) (56)对比文件 CN 110106248 A,2019.08.09 CN 109355373 A,2019.02.19 WENXING SUN等.CircRNA expres sion profiles in human visceral preadipocytes and adipocytes. . 《MOLECULAR MEDICINE REPORTS》 .2020,第21卷第817页左栏第1段， 表 S1. Lan-Fang Sun 等.Circular Rim s2 Deficiency Causes Reti nal Degenerati on. 《Adv. Bi ology》 .2021,第5卷第210 0906篇第1- 11页. 审查员 陈皓 (54)发明名称 一种用于诊断糖尿病视网膜病变的环状RNA 标记物及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种环状RNA  hsa_circ_ 0095008及其特异性扩增引物， 所述环状RNA对应 的cDNA核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述特 异性扩增引物包括上游引物和下游引物， 其中， 所述上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所 示， 所述下游引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3 所示。 与正 常人、 糖尿病患者相比， 在糖尿病视网 膜变性患者的外周血单个核细胞中hsa_circ_ 0095008表达异常下调， 因此hsa_circ_0095008 可用于患有糖 尿病视网膜病变风险人群的筛查。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114457150 B 2022.08.30 CN 114457150 B 1.一种试剂盒在制备用于筛查糖尿病视网膜病变的试剂中的应用， 其特征在于， 所述 试剂盒包括用于扩增环状RNA  hsa_circ_0095008的特异性扩增引物、 内参基因GAPDH引物 和扩增体系， 特异 性扩增引物包括上游引物和下游引物， 所述上游引物的核苷 酸序列如S EQ  ID NO:2所示； 所述下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 所述环状RNA对应的cDNA核 苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 内参基因GAPDH上游引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO:4所示； 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所示。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述扩增体系为实时荧光定量PCR扩增体 系， 包括Ex  Taq酶， dNTP  Mixture， Mg2+， Tli RNaseH和TB  Green。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457150 B 2一种用于诊断糖尿病视网膜病变的环状RNA标记物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 具体涉及一种用于诊断糖尿病视网膜病变的环状 RNA。 背景技术 [0002]糖尿病视网膜病变(diabetic  retinopathy， DR)是糖尿病患者视力损害的最主要 因素。 目前已知近50％的糖尿病视网膜病变患者会出现糖尿病性黄斑水肿(diabetic   macular edema， DME)并发症。 DME最主要的病理特征包括血 ‑视网膜屏障破坏(血管构型异 常)和慢性炎症反应， 而后者介导的多种炎症因子、 趋化因子通常是视网膜和脉络膜渗漏的 重要因素。 [0003]糖尿病视网膜病变的发生发展是一个长期的病理过程， 通常是多因素作用的结 果。 在临床工作中早期发现的糖尿病视网膜病变， 通过合理的治疗可延缓其病程进展甚至 恢复正常视功 能， 因此应当选择恰当的诊断方法。 眼科常用的相关眼底检查方法为糖尿病 视网膜病变诊断的金标准， 检测相关糖尿病视网膜病变危险因子能够为糖尿病视网膜病变 的早期诊断以及病情评估提供有力证据， 将两者联合起来有利于早期发现糖尿病视网膜病 变， 可降低糖尿病视网膜病变患者 致盲的发病率， 值得在临床中推广使用。 [0004]环状RNA(circular  RNA， circRNA)是一类特殊的非编码RNA， 其呈封闭环状结构， 不受RNA外切酶影响， 表达更稳定， 不易降解。 circRNA普遍存在生物体内， 广泛地参与生命 活动的调控(如影响RNA聚合酶延长)， 参与转录及转录后的基因表达调控， 作为miRNA抑制 剂充当竞争性内源RNA(ceRNA)抑制靶 标基因的表达， 与RNA结合蛋白互作调控翻译过程等。 越来越多的证据显示， circRNA与肿瘤、 糖尿病等多种人类疾病密切相关。 [0005]circRNA具有很强的组织或发育阶段的特异性， 稳定性更高， 耐受温度变化， 是较 理想的疾病诊断分子标志物和治疗靶点。 circRNA可在疾病 易感性检测、 疾病诊断、 治疗和 预后等方面发挥作用， 是非常有应用价值的研究对 象。 因此发现和筛选糖尿病及其并发症 的circRNA标志 物， 对早期防治糖尿病视网膜病变具有重要的意 义和价值。 发明内容 [0006]为解决上述 技术问题， 本发明包括以下几个方面： [0007]本发明第一方面提供一种用于扩增环状RNAhsa_circ_0095008的特异性扩增引 物， 所述特异性扩增引物包括上游引物和下游引物， 其中， [0008]所述上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； [0009]所述下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； [0010]所述环状RNA对应的cDNA核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0011]具体地， 所述环状RNAhsa_circ_0095008对应的cDNA核苷酸序列为： AGAAGCTCATG TTCAAGAATGCGCCAACCCCACA GGAGTTCCGGGA GGGGGAAGATGCCGTGATTGTGTGTGATGTGGTCAGCTCCC TCCCACCAACCATCATCTGGAAACACAAA GGCCGAGATGTCATCCTGAAAAAA GATGTCCGATTCATA GTCCTGTC说　明　书 1/4 页 3 CN 114457150 B 3