(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210098349.8 (22)申请日 2022.01.27 (71)申请人 宁波市药品检验所 地址 315048 浙江省宁波市高新区光 华路 299弄C2栋 (72)发明人 陈志禹　陈建伟　曹琳　喻莹　 林海伦　 (74)专利代理 机构 宁波市甬远专利代理有限公 司 33409 专利代理师 沈春红 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与 探针组合、 PCR方法和试剂盒 (57)摘要 一种用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引 物与探针组合、 PCR方法和试剂盒， 其中用于川贝 母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合包括 以下引物与探针组合中的一种或多种： 组合1， 包 括SEQ ID NO1‑2的引物、 SEQ  ID NO3的探针； 组 合2， 包括SEQ ID NO4‑5的引物、 SEQ  ID NO6的探 针； 组合3， 包括SEQ  ID NO7‑8的引物、 SEQ  ID  NO9的探针； 组合4， 包括SEQ  ID NO10‑11的引物 R、 SEQ ID NO12的探针P； 组合5， 包括SEQ  ID  NO13‑14的引物、 SEQ  ID NO15的探针； 组合6， 包 括SEQ ID NO16‑17的引物、 SEQ  ID NO18的探针； 组合7， 包括SEQ  ID NO19‑20的引物、 SEQ  ID  NO21的探针； 组合8， 包括SEQ  ID NO22‑23的引 物、 SEQ ID NO24的探针。 具有 不仅可以准确的鉴 别真伪， 同时还能够定量检测的优点。 权利要求书2页 说明书9页 序列表10页 附图5页 CN 114480708 A 2022.05.13 CN 114480708 A 1.一种用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合， 其特征在于： 该组合包括 以下引物与探针组合中的一种或多种： （1） 引物与探针 组合1， 包括SEQ ID NO1的引物F、 SEQ ID NO2的引物R、 SEQ ID NO3的探 针P； （2） 引物与探针 组合2， 包括SEQ ID NO4的引物F、 SEQ ID NO5的引物R、 SEQ ID NO6的探 针P； （3） 引物与探针 组合3， 包括SEQ ID NO7的引物F、 SEQ ID NO8的引物R、 SEQ ID NO9的探 针P； （4） 引物与探针组合4， 包括SEQ ID NO10的引物F、 SEQ ID NO11的引物R、 SEQ ID NO12 的探针P； （5） 引物与探针组合5， 包括SEQ ID NO13的引物F、 SEQ ID NO14的引物R、 SEQ ID NO15 的探针P； （6） 引物与探针组合6， 包括SEQ ID NO16的引物F、 SEQ ID NO17的引物R、 SEQ ID NO18 的探针P； （7） 引物与探针组合7， 包括SEQ ID NO19的引物F、 SEQ ID NO20的引物R、 SEQ ID NO21 的探针P； （8） 引物与探针组合8， 包括SEQ ID NO22的引物F、 SEQ ID NO23的引物R、 SEQ ID NO24 的探针P。 2.根据权利要求1所述的用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合， 其特征 在于： 所述的用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合， 该组合包括以下引物与 探针组合中的一种或多种： 引物与探针组合1， 包括SEQ ID NO1的引物F、 SEQ ID NO2的引物 R、 SEQ ID N O3的探针P； 和/或引物与探针组合8， 包括SEQ ID N O22的引物F、 SEQ ID N O23的 引物R、 SEQ ID NO24的探针P。 3.根据权利要求2所述的用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合， 其特征 在于： 所述的川贝母真伪鉴别的引物与探针组合为： 引物与探针组合1， 包括SEQ ID NO1的 引物F、 SEQ ID NO2的引物R、 SEQ ID NO3的探针P。 4.根据权利要求2所述的用于川贝母真伪鉴别与定量检测的引物与探针组合， 其特征 在于： 所述的川贝母定量检测的引物与探针组合为： 引物与探针组合8， 包括SEQ ID NO22的 引物F、 SEQ ID NO23的引物R、 SEQ ID NO24的探针P。 5.一种川贝母真伪鉴别的PCR方法， 其特征在于： 该方法包括： 提取川贝母样品的基因 组DNA， 以提取的基因组DNA为模板， 利用引物与探针组合进行双重荧光定量PCR反应； 然后 采用2‑∆ ∆Ct相对定量法实现对川贝母常见伪品掺 假的快速 定性和定量检测。 6.根据权利要求5所述的川贝母真伪鉴别的PCR方法， 其特征在于： 所述的双重荧光定 量PCR反应体系为20 μL： 10ng/ μL的模板DNA 1 μL， 10 μmol/L的引物 0.6 μL ×4， 10 μmol/ L的探针P732 0.3 μL， 10 μmol/L的探针P1222 0.3 μL， 1 ×QN ROX Dye Solution 1 μL， 2 ×Probe PCR Master Mix 10 μL， 无菌超纯水5 μL； 反应参数： 9 5℃预变性2 min， 循环扩增 反应40 次。 7.根据权利要求5所述的川贝母真伪鉴别的PCR方法， 其特征在于： 所述循环扩增反应 40 次， 每次循环扩增的条件为： 95℃变性5 s， 6 0℃退火3 0 s。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480708 A 28.一种用于检测川贝母掺伪和定量检测的实时荧光定量PCR试剂 盒， 其特征在于： 该试 剂盒包括权利要求1 ‑4任一权利要求所述的用于检测川贝母掺伪和定量检测的PCR引物与 探针组合。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480708 A 3