(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210098707.5 (22)申请日 2022.01.27 (71)申请人 河南科技大 学 地址 471000 河南省洛阳市开元 大道263号 (72)发明人 赵德辉　王春平　陈鹏　曾占奎　 赵越　王玉莹　闫雪芳　李家创　 (74)专利代理 机构 洛阳华和知识产权代理事务 所(普通合伙) 4120 3 专利代理师 李世鹏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测小麦粒重TaRSR-A1基因的KASP标记及 其应用 (57)摘要 本发明涉及检测小麦粒重 TaRSR‑A1基因的 KASP标记及其应用， 属于分子遗传育种技术领 域， 本发明提供特异成套引物 Kasp‑TaRSR‑A1， 利 用所述Kasp‑TaRSR‑A1进行小麦千粒重 TaRSR‑A1 基因的检测， 人为误差低， 分析通量高， 适用大量 样本的检测。 本发明提供的共显性分子标记应用 于TaRSR‑A1基因的转育， 对于加快利用小麦千粒 重TaRSR‑A1基因进行遗传改良， 提高育种效率具 有重要实 践意义。 权利要求书2页 说明书8页 序列表3页 附图2页 CN 114438244 A 2022.05.06 CN 114438244 A 1.检测小麦粒重 TaRSR‑A1基因的KASP标记， 其特征在于： 所述KASP标记为由引物1、 引 物2和引物3组成的成套引物 Kasp‑TaRSR‑A1； 所述引物1自5 ’端到3’端依次为标签序列A和SEQ  ID NO： 01的第22 ‑39位所示的单链 DNA； 所述引物2自5 ’端到3’端依次为标签序列B和SEQ  ID NO： 02的第22 ‑39位所示的单链 DNA； 所述引物3为SEQ  ID NO： 03所示的单链DNA。 2.根据权利要求1所述的KASP标记， 其特征在于： 所述标签序列A为FAM荧光标签序列， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 01的第1‑21位所示； 所述标签序列B为HEX荧光标签序列， 其核 苷酸序列如SEQ  ID NO： 02的第1 ‑21位所示。 3.一种检测小麦粒重 TaRSR‑A1基因的试剂盒， 所述试剂盒包含权利要求1所述的KASP 标记。 4.一种检测或辅助检测小麦 TaRSR‑A1基因型的方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 步骤一、 提取待测小麦基因 组DNA； 步骤二、 以所述待测小麦基因组DNA为模板， 采用成套引物 Kasp‑TaRSR‑A1进行PCR扩 增， 得扩增产物； 所述成套引物 Kasp‑TaRSR‑A1由引物1、 引物2和引物3组成， 所述引物 1的核苷酸序列如 SEQ ID NO： 01所示， 所述引物2的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 02所示， 所述引物3的核苷酸序 列如SEQ ID NO： 03所示； 步骤三、 将步骤二所得扩增产物进行荧光信号扫描， 采用Kluster  Caller软件对扫描 数据进行分析， 根据分析 结果进行基因分型。 5.根据权利 要求4所述的方法， 其特征在于： 步骤二中所述PCR扩增体积为5   µl， 反应体 系如下： 0.056  μl Primer Mix， 2.5 μl Master Mix， 2.2μl  Template  DNA， 0.244  μl  ddH2O； 所述Master  Mix中包含荧光探针A、 荧光探针B、 淬灭探针A和淬灭探针B； 所述Pri mer  Mix中各引物的配比为： 12 %的引物1、 12 %的引物2和30%的引物3 。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于： 步骤三中， 按照如下确定小麦 TaRSR‑A1基 因型： 若待测小麦扩增产物的荧光信号数据经Kluster  Caller软件分析呈现蓝色， 则小麦 TaRSR‑A1基因型为AA； 若待测小麦扩增产物的荧光信号数据经Kluster  Caller软件分析呈 现红色， 则小麦 TaRSR‑A1基因型为GG； 若待测小麦扩增的产物 的荧光信号数据经Kluster   Caller软件分析 呈现绿色， 则小麦 TaRSR‑A1基因型为AG。 7.权利要求1或2所述的KASP标记、 权利要求3所述的试剂盒、 或权利要求4 ‑6任意一种 所述的方法在 如下 （A）‑（F） 任意 一种中的应用： （A） ： 用于检测小麦或小麦杂交后代的 TaRSR‑A1基因； （B） ： 用于鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状； （C） ： 用于培育、 筛选或辅助筛选具有高或低千粒重性状的小麦单株、 株系、 品系或品 种； （D） ： 制备用于检测小麦或小麦杂交后代的 TaRSR‑A1基因的产品； （E） ： 制备用于鉴定或辅助鉴定小麦的千粒重性状的产品； （F） ： 制备用于培育、 筛选或辅助筛选具有高或低千粒重性状的小麦单株、 株系、 品系或权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114438244 A 2品种的产品。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114438244 A 3