(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210097027.1 (22)申请日 2022.01.27 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114107513 A (43)申请公布日 2022.03.01 (73)专利权人 北京优乐复生科技有限责任公司 地址 102206 北京市昌平区回龙观镇 生命 园路8号院一区11号-1-5层101 （4层 101-102室） (72)发明人 张翼　吴凯　单柳颖　金婉　 (74)专利代理 机构 北京林达刘知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11277 代理人 刘新宇　李茂家 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 108350504 A,2018.07.31 US 202010945 6 A1,2020.04.09 US 2021172029 A1,2021.0 6.10 US 2012101023 A1,2012.04.26 CN 102912019 A,2013.02.0 6 CN 1097972 21 A,2019.0 5.24 审查员 杨佳倩 (54)发明名称 一种用于膀胱尿路上皮癌诊断的检测方法 和试剂盒 (57)摘要 本发明涉及生物 技术和医学诊断领域， 具体 涉及一种用于膀胱尿路上皮癌诊断的检测方法 和试剂盒。 本发 明提供了一种检测待测样品中的 DNA甲基化差异区域的引物组合在制备用于检测 或预测受试者是否患有膀胱尿路上皮癌或者膀 胱尿路上皮癌患者分型是否为肌层浸润性或非 肌层浸润性的试剂或试剂盒中的用途， 以及一种 用于检测或预测受试者是否患有膀胱尿路上皮 癌或者膀胱尿路上皮癌患者分型是否为肌层浸 润性或非肌层浸润性的试剂盒。 本发 明提供的用 于膀胱尿路上皮癌诊断的检测方法及试剂盒具 有优良的灵敏度和特异性， 对临床上膀胱尿路上 皮癌的诊断、 治疗， 以及后期 的监测与预后评估 具有很大的积极意义， 为进一步进行早期诊断提 供了理论依据。 权利要求书1页 说明书13页 序列表36页 附图3页 CN 114107513 B 2022.05.03 CN 114107513 B 1.一种检测待测样品中的DNA甲基化差异区域的引物组合在制备用于检测或预测受试 者是否患有膀胱尿路上皮癌或者膀胱尿路上皮癌患者分型是否为肌层浸润性或非肌层浸 润性的试剂或试剂盒中的用途， 其中， 所述DNA甲基化差异区域由如下所示的人类hg19版本 基因组中的区域组成： chr1： 86038429bp ‑86548655bp、 chr7： 23210805bp ‑23541085bp、 chr12： 50786446bp ‑51796719bp、 chr12： 53396863bp ‑55397136bp、 chr12： 51400340bp ‑ 55400617bp、 chr 5： 2327659bp ‑2397867bp、 chr 5： 5227879bp ‑5298195bp、 chr5： 14341021bp ‑ 14541266bp、 chr5： 15200260bp ‑15900461bp、 chr8： 2006233bp ‑2146598bp、 chr8： 102136659bp ‑102436833bp、 chr12： 130914602bp ‑130994836bp、 chr17： 77333510bp ‑ 77393712bp、 chr18： 3869388bp ‑3899760bp、 chr18： 11741967bp ‑11762330bp、 chr19： 1103012bp ‑1123479bp和chr3： 180428100bp ‑181458540bp； 所述引物组合由BLCBSP_V1 ‑4、 BLCBSP_V1 ‑9、 BLCBSP_V1 ‑13、 BLCBSP_V1 ‑14、 BLCBSP_V1 ‑15、 BLCBSP_V2 ‑7、 BLCBSP_V2 ‑8、 BLCBSP_V2 ‑10、 BLCBSP_V2 ‑11、 BLCBSP_V2 ‑16、 BLCBSP_V2 ‑17、 BLCBSP_V2 ‑18、 BLCBSP_V2 ‑ 19、 BLCBSP_V2 ‑21、 BLCBSP_V2 ‑22、 BLCBSP_V2 ‑24、 BLCBSP_V2 ‑33、 BLCBSP_V2 ‑35和MN‑DMR4‑ 1组成； BLCBSP_V1 ‑4中的正向引物序列如SEQ  ID NO:1所示， BLCBSP_V1 ‑4中的反向引物序 列如SEQ ID NO:2所示； BLCBSP_V 1‑9中的正向引物序列如SEQ  ID NO:3所示， BLCBSP_V1 ‑9 中的反向引物序列如SEQ  ID NO:4所示； BLCBSP_V1 ‑13中的正向引物序列如SEQ  ID NO:5所 示， BLCBSP_V1 ‑13中的反向引物序列如SEQ  ID NO:6所示； BLCBSP_V1 ‑14中的正向引物序列 如SEQ ID NO:7所示， BLCBSP_V 1‑14中的反向引物序列如SEQ  ID NO:8所示； BLCBSP_V 1‑15 中的正向引物序列如SEQ  ID NO:9所示， BLCBSP_V1 ‑15中的反向引物序列如SEQ  ID NO:10 所示； BLCBSP_V2 ‑7中的正向引物序列如SEQ  ID NO:11所示， BLCBSP_V2 ‑7中的反向引物序 列如SEQ ID NO:12所示； BLCBSP_V2 ‑8中的正向引物序列如SEQ  ID NO:13所示， BLCBSP_V2 ‑ 8中的反向引物序列如SEQ  ID NO:14所示； BLCBSP_V2 ‑10中的正向引物序列如SEQ  ID NO: 15所示， BLCBSP_V2 ‑10中的反向引物序列如SEQ  ID NO:16所示； BLCBSP_V2 ‑11中的正向引 物序列如SEQ  ID NO:17所示， BLCBSP_V2 ‑11中的反向引物序列如SEQ  ID NO:18所示； BLCBSP_V2 ‑16中的正向引物序列如SEQ  ID NO:19所示， BLCBSP_V2 ‑16中的反向引物序列如 SEQ ID NO:20所示； BLCBSP_V2 ‑17中的正向引物序列如SEQ  ID NO:21所示， BLCBSP_V2 ‑17 中的反向引物序列如SEQ  ID NO:22所示； BLCBSP_V2 ‑18中的正向引物序列如SEQ  ID NO:23 所示， BLCBSP_V2 ‑18中的反向引物序列如SEQ  ID NO:24所示； BLCBSP_V2 ‑19中的正向引物 序列如SEQ  ID NO:25所示， BLCBSP_V2 ‑19中的反向引物序列如SEQ  ID NO:26所示； BLCBSP_ V2‑21中的正向引物序列如SEQ  ID NO:27所示， BLCBSP_V2 ‑21中的反 向引物序列如SEQ  ID  NO:28所示； BLCBSP_V2 ‑22中的正向引物序列如SEQ  ID NO:29所示， BLCBSP_V2 ‑22中的反向 引物序列如SEQ  ID NO:30所示； BLCBSP_V2 ‑24中的正向引物序列如SEQ  ID NO:31所示， BLCBSP_V2 ‑24中的反向引物序列如SEQ  ID NO:32所示； BLCBSP_V2 ‑33中的正向引物序列如 SEQ ID NO:33所示， BLCBSP_V2 ‑33中的反向引物序列如SEQ  ID NO:34所示； BLCBSP_V2 ‑35 中的正向引物序列如SEQ  ID NO:35所示， BLCBSP_V2 ‑35中的反向引物序列如SEQ  ID NO:36 所示； MN‑DMR4‑1中的正向引物序列如SEQ  ID NO:37所示， MN ‑DMR4‑1中的反向引物序列如 SEQ ID NO:38所示。 2.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述待测样品为来源于所述受试者的尿液 cfDNA或膀胱尿路上皮癌组织gDNA。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114107513 B 2一种用于膀胱尿路上皮 癌诊断的检测方 法和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及 生物技术和医学诊断领域， 具体涉及 一种用于膀胱尿路上皮癌诊断的 检测方法和试剂盒。 背景技术 [0002]膀胱癌(Bladder  cancer， BCa)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤， 其发病率在世界范 围内呈上升趋势。 BCa主要分为三种病理类型： 膀胱尿路上皮癌(Bladder  Urothelial   Carcinoma， BLCA)、 鳞状细胞癌和腺癌， 其中BLCA占90％， 2020年全球新增死 亡212,500例。 [0003]BLCA可进一步分为肌层 侵袭性BCa(肌层浸润性)和非肌层 侵袭性BCa(非肌层浸润 性)， 其中非肌层浸润性约占所有病例的75％。 两类BLCA的生物学行为不同， 预后差异很大， 需要区别治疗。 由于非肌层浸润性不侵及膀胱肌层， 通过尿道膀胱肿瘤切除术配合囊内灌 注化疗药物或卡介苗治疗能够起到有效的治疗。 而肌层浸润性具有更强的侵袭性， 生长速 度快， 且转移潜能大大提高， 通常需要行膀胱