(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210105893.0 (22)申请日 2022.01.28 (66)本国优先权数据 202111632042.3 2021.12.28 CN (71)申请人 河北农业大 学 地址 071001 河北省保定市南市区灵雨寺 街289号 (72)发明人 樊宝良　倪慧勇　王学静　王志永　 崔梦笛　谢建国　 (74)专利代理 机构 河北国维致远知识产权代理 有限公司 13137 代理人 任青 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/683(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对、 试 剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测鸡金银羽位点 基因型的引物对、 试剂盒及检测方法， 属于动物 遗传育种和生物技术领域。 本发 明针对导致银羽 表型的SLC45A2基因突变设计了引物对， 并在下 游引物引入了一个错配碱基， 该错配碱基结合基 因本身的突变能够形成BspHI酶切位点， 从而使 该引物能用于PCR ‑RFLP分析。 通过以待判定基因 型的鸡的基因组DNA为模板用该引物对进行PCR 扩增， 然后对PCR产物酶切、 琼脂糖凝胶电泳检 测， 即可根据电泳结果判定鸡金银羽位点(即上 述SLC45A2基因突变位点)的基因型。 与PCR ‑SSCP 和PCR产物直接测序的方法相比， 本发明建立的 方法操作简单、 成本低、 周期短， 大大提高了鸡金 银羽位点基因型判定的准确性,不需要特殊的仪 器,易推广普及。 权利要求书2页 说明书6页 序列表7页 附图3页 CN 114395632 A 2022.04.26 CN 114395632 A 1.一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对， 其特征在于， 包括由SEQ  ID NO.1所示的上 游引物和SEQ  ID NO.2所示的下游引物。 2.一种检测鸡金银羽位点基因型的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括上述由SEQ   ID NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO.2所示的下游引物组成的引物对。 3.根据权利要求2所述的检测鸡 金银羽位点基因型的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒 还包括Easy  Taq DNA聚合酶、 Easy  Taq DNA聚合酶反应缓冲液、 dNTPS、 BspHI限制性内切酶 及其反应缓冲液。 4.一种检测鸡金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， 用权利要求1所述的引物对通过 PCR‑RFLP方法对鸡金 银羽位点基因型进行检测。 5.根据权利要求4所述的检测鸡 金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， 具体包括以下 步骤： S1、 以所述引物对进行PCR扩增， 得到扩增片段； S2、 对扩增片段进行BspHI酶切， 对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳， 根据琼脂糖凝胶电 泳结果判定鸡金 银羽位点的基因型。 6.根据权利要求5所述的检测鸡金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增 的反应体系为： 扩增反应程序为： 95℃预变性5min； 95℃变性15s， 62℃退火15s， 72℃延伸15s， 35个循 环； 72℃延伸7mi n； 4℃保存。 7.根据权利要求5所述的检测鸡金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， 所述BspHI酶 切的反应体系为： S1所得的所述扩增产物10 μL， 10 ×BspHI限制性内切酶反应缓冲液1.5 μL， 10U/ μL BspHI限制性内切酶0.3 μL， 灭菌纯 水3.2 μL。 8.根据权利要求7所述的检测鸡金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， 所述BspHI酶 切的反应条件为： 37℃， 酶切过夜。 9.根据权利要求5所述的检测鸡 金银羽位点基因型的方法， 其特征在于， S2中判定鸡 金 羽位点的基因型的方法为： 电泳只出现90bp、 21bp条带， 个体羽色为白羽， 该位点基因型公 鸡为SS型， 母鸡为S ‑半合子； 电泳同时出现111bp、 90bp和21bp条带， 个体羽色为白羽， 性别 为公鸡， 该位点基因型为Ss； 电泳只出现111b p条带， 个体羽色为有色羽或白羽， 该位点基因权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114395632 A 2型公鸡为s s， 母鸡为s ‑半合子。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114395632 A 3