(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210107234.0 (22)申请日 2022.01.28 (71)申请人 上海翔琼 生物技术有限公司 地址 200333 上海市普陀区中江路879弄4 号楼406室 (72)发明人 朱苗骏　符屺凡　谭若颖　王海龙　 薛竞东　俞仲伟　 (74)专利代理 机构 上海一平知识产权代理有限 公司 3126 6 专利代理师 徐迅　崔佳佳 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/22(2006.01) C12R 1/385(2006.01) C12R 1/445(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/19(2006.01) C12R 1/37(2006.01) C12R 1/725(2006.01) C12R 1/35(2006.01) C12R 1/36(2006.01) (54)发明名称 一种检测尿道病原体感染的多重荧光定量 探针法PCR试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种泌尿生殖道感染病原体 多重检测试剂盒及其用途。 具体地， 本发明开发 了一种用于检测12种临床常见尿道感染病菌的 荧光定量PCR试剂盒。 本发明提供的优化的引物 和探针具有更优秀的的12组PCR引物和探针的组 合具有优异的稳定性， 并且在PCR反应过程中不 会互相发生干扰， 因此能够用于多重荧光定量 PCR方法。 权利要求书2页 说明书26页 序列表10页 附图15页 CN 114457174 A 2022.05.10 CN 114457174 A 1.一种用于检测泌尿道病原体的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括第 一容器， 所述 第一容器中包括： (A1)针对奇异变形杆菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:16所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:17所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:18所示的探针。 2.如权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中还包括选自下组的一种或多 种引物探针组合： (A2)针对粪肠球菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:13所示的上游引物、 如SEQ  ID NO: 14所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:15所示的探针， 和 (A3)针对大肠埃希氏菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:19所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:20所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:21所示的探针。 (A4)针对肺炎克雷伯杆菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:4所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:5所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:6所示的探针， (A5)针对铜绿假单胞菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:7所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:8所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:9所示的探针， 和 (A6)针对金黄色葡萄球菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:10所示的上游引物、 如SEQ   ID NO:11所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:12所示的探针； (A7)针对鲍曼不动杆菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:22所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:23所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:24所示的探针， (A8)针对微小脲原体的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:25所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:26所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:27所示的探针， 和 (A9)针对白色念珠菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:28所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:29所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:30所示的探针； (A10)针对生殖支原体的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:31所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:32所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:33所示的探针， (A11)针对沙眼衣原体的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:34所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:35所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:36所示的探针， 和 (A12)针对淋病奈瑟菌的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:37所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:38所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:39所示的探针。 3.如权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括选自第二容器、 第三容 器和第四容器中一个或多个的容器。 4.如权利要求3所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述的第 一容器至第四容器中分别含有所 述的引物探针组合(A1)～(A12)中的1、 2或3种， 且各容器之间引物探针组合互不重复。 5.如权利要求4所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述的第 一容器、 第二容器、 第 三容器和第 四容器中， 均进一 步包括针对内标的引物对和探针。 6.如权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述针对内标的引物探针组合选自下组： (A13)针对人类β ‑actin的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:1所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:2所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:3所示的探针； (A14)针对人类GAPDH的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:58所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:59所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:60所示的探针； 和权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114457174 A 2(A15)针对人类PARP2的引物探针组合： 如SEQ  ID NO:61所示的上游引物、 如SEQ  ID  NO:62所示的下游引物、 和SEQ  ID NO:63所示的探针。 7.如权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述探针上的一端标记有荧光发生基团， 另一端标记有荧 光淬灭基团。 8.如权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 设立荧光通道F1、 F2、 F3和F4， 荧光通道F1 ‑ F4分别对应不同的荧光发生基团， 同一容器中不同探针互不重复地具有F1、 F2、 F3或F4对应 的荧光发生基团。 9.一种用于检测泌尿道病原体的方法， 其特 征在于， 所述方法包括： (S1)获取待测样品； (S2)使用如权利要求1 ‑8中任一项所述的试剂盒， 对所述样品进行荧光定量PCR反应， 从而检测所述泌尿道病原体。 10.如权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述的方法用于同时检测12种病原体： 肺炎 克雷伯杆菌、 铜 绿假单胞菌、 金黄色葡萄球菌、 粪肠球菌、 奇异变形杆菌、 大肠埃希菌、 鲍曼 不动杆菌、 微小脲原体、 白色念珠菌、 生殖支 原体、 沙眼衣原体、 和淋病奈瑟菌 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114457174 A 3