(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210105941.6 (22)申请日 2022.01.28 (71)申请人 上海市农业 生物基因中心 地址 201106 上海市闵行区北翟路2 901号 (72)发明人 马孝松　刘鸿艳　罗利军　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 水稻耐高温调控基因Hsp70的分子标记及其 应用 (57)摘要 本发明提供了一种可以鉴定水稻耐高温基 因Hsp70的分子标记、 及其正反引物与并可将其 应用于水稻耐高温的筛选与育种。 该标记通过序 列差异设计不存在遗传交换， 准确性高； 直接用 于聚丙烯酰胺凝胶电泳检测， 更为简便； 可以缩 短育种周期， 提高育种效率。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图1页 CN 114717352 A 2022.07.08 CN 114717352 A 1.一种水稻耐高温基因Hsp70的分子标记， 所述分子标记位于水稻基因组第1号染色 体， 命名为Hsp70 ‑12， 用于扩增所述 分子标记的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID  NO.2所示。 2.一种与水稻耐热 特性相关的分子标记的获得 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 分别以水稻品种旱恢3号和沪旱1B的基因组DNA为模板， 采用核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1和SEQ  ID NO.2所示的引物进行PCR扩增； 将所述PCR扩增得到的产物经电泳分离后， 得到的大小为131bp的扩增片段或大小为 119bp的扩增片段， 即为目标分子标记。 3.权利要求1或2所述的分子标记在水稻耐高温基因Hsp70基因型的检测和/或在水稻 耐高温特性的鉴定中的应用和/或在耐高温水稻的辅助选择育种中的应用。 4.一种分子标记用于水稻耐高温基因Hsp70基因型的检测方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 1)提取供试水稻样品基因 组DNA； 2)利用核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的引物对步骤1)中所提取基因 组进行PCR扩增， 获得扩增产物； 3)通过电泳检测步骤2)所述扩增产物， 如果有大小为131bp的扩增产物， 则表示所述供 试水稻含有高温敏感等位基因； 如果有大小为 119bp的扩增产 物， 则表示所述供试水稻含有 耐高温等 位基因。 5.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于， 所述电泳检测为6％聚丙烯酰胺凝胶 电泳检测。 6.根据权利 要求4或5所述的检测方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的扩增体系包含： Taq 酶， 模板DNA， dNTP， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的引物， PCR  buffer。 7.根据权利要求6所述的检测方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的PCR反应程序为： 95 ±1 ℃预变性4 ‑6min， 然后按98 ±1℃20s， 54.5±0.5℃下15‑25s， 71±1℃下20‑30s进行32 个循 环， 最后71 ±1℃下延伸4 ‑6min。 8.一种分子标记用于耐高温水稻的辅助选择育种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)提取供试水稻样品基因 组DNA； 2)利用核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的引物对步骤1)中所提取基因 组进行PCR扩增， 获得扩增产物； 3)通过电泳检测步骤2)所述扩增产物， 如果有大小为131bp的扩增产物， 则所述供试水 稻为高温敏感品种； 如果有大小为119bp 的扩增产物， 则表示该所述供试水稻为耐高温品 种。 9.根据权利要求8所述的辅助选择育种的方法， 其特征在于， 所述131bp的扩增产物为 水稻高温敏感品种旱恢3号的Hsp70基因的等位基因， 所述119bp的扩增产物为水稻耐高温 品种沪旱1B的Hsp70基因的等 位基因。 10.一种用于鉴定水稻耐高温特性的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒含有： 核苷酸序 列如SEQ ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的引物， 所述引物用于扩增水稻耐高温基因Hsp70的 分子标记， 所述分子标记为 位于水稻第1号染色体上的Hsp70 ‑12。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717352 A 2水稻耐高 温调控基因Hsp70的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于植物繁殖技术领域， 具体涉及农业生物技术领域， 具体涉及水稻耐高 温调控基因Hsp70的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]水稻是全世界近一半人口的主粮， 同时， 也是我国最重要的粮食作物。 但是随着全 球气候变暖， 高温对 水稻生产造成了严重影响， 在水稻抽穗开花期 遇到高温天气， 会导致水 稻结实率下降， 造成水稻减产； 在水稻灌浆期 遇到高温天气会影响水稻籽粒充实度， 水稻产 量以及大米品质都会下降。 因此， 培育耐高温水稻品种对于确保高温条件下水稻产量和大 米品质具有重要意义。 大量研究表明， 水稻对高温的耐受性受到内在遗传机制和外界环境 因子的双重因素调节。 因此， 了解水稻耐高温的遗传规律， 通过改良水稻对高温的耐受性， 对于确保水稻在遭 遇高温天气时的高产稳产和 确保大米品质具有重要的意 义。 [0003]近年， 随着遗传学和分子生物学技术的发展， 调控水稻耐高温的基因TT1(Li  et  al.,Nature  Genetics,2015,47(7):827 ‑33)、 SLG1(Xu  et al.,Nature  Communications, 2020,11(1):5441)等被克隆。 其中有研究表明来源于非洲稻CG14中的TT1转入水稻中可以 提高水稻对高温的耐受性(Li  et al.,Nature  Genetics,2015,47(7):827 ‑33)。 突变体 slg1茎秆纤细， 粒长增加， 体内tRNA硫醇化水平降低， 对高温敏感； 过表达SLG1能显著提高 水稻对高温耐受性。 SLG1在籼粳两亚种之间有分化， 启动子和编码区的变异导致籼稻品种 硫醇化tRNA水平的提高和耐热性的增强(Xu  et al.Nature  Communication s,2020,11(1): 5441)。 [0004]分子标记辅助 选择是一种利用与耐高温基因紧密连锁标记或者基 因内功能标记， 在后代中结合基因型和表型鉴定对目标性状进 行选择的现代育种技术。 该方法不仅可大大 缩短育种年限， 提高育种效率， 而且还节约了大量的人力、 物力成本。 因此在改良水稻高温 耐受性， 确保水稻在高温环境下 的高产稳产方面有很大 的应用价值， 开发耐高温基因的功 能性标记对充分利用该基因， 进一步改良水稻对高温的耐受性， 对确保粮食安全具有重要 意义。 发明内容 [0005]基于此， 本 发明的目的在于提供一种水稻耐高温基因Hsp70的分子标记、 及其正反 引物与应用。 具体技 术方案如下： [0006]一种水稻耐高温基因Hsp70的分子标记， 所述分子标记为耐高温基因Hsp70 ‑12， 用 于扩增所述分子标记的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示。 [0007]在其中一些实施例中， 所述分子标记位于水稻基因 组第1号染色体。 [0008]在其中一些实施例中， 所述分子标记的大小为131bp和/或1 19bp。 [0009]在其中一些实施例中， 所述分子标记的核苷酸序列为SEQ  ID NO.3和/或SEQ  ID  NO.4。说　明　书 1/7 页 3 CN 114717352 A 3