(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210109348.9 (22)申请日 2022.01.28 (71)申请人 北京大学人民医院 地址 100044 北京市西城区西直门南大街 11号 (72)发明人 陈冬波　陈红松　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 黄爽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16H 50/20(2018.01) G16H 50/30(2018.01) G16B 25/00(2019.01)G06Q 10/04(2012.01) (54)发明名称 肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建方 法 (57)摘要 本发明提供一种肝细胞癌患者术后复发预 测模型的构建方法。 本发明系统研究了8个NKG2D 配体(MICA、 MICB及ULBP1 ‑6)在HCC中的表 达和分 布， 发现MICA、 MICB和ULBP4在HCC组织中高表 达， ULBP3可能在HCC进展中发挥重要作用。 提示在 HCC中可以通过靶向MICB构建高亲和力的NKG2D ‑ CAR‑NK细胞。 基于MICA、 ULBP3和ULBP5的RFS预测 模型可以预测肝切除术后肝癌患者的复发， 可能 具有潜在的临床价 值。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图5页 CN 114277155 A 2022.04.05 CN 114277155 A 1.用于预测肝细胞癌患者术后复发的生物标记物， 其特征在于， 其为肝细胞癌患者体 内MICA和/或ULBP3基因的相对表达量； MICA基因表达量与术后复发的可能性呈正相关， ULBP3基因表达量与术后复发的可能性呈负相关。 2.检测MICA、 ULBP3和/或ULBP5基因表达量的试剂在制备肝细胞癌患者术后 复发的评 价试剂中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 检测MICA基因表达量的试剂包含如SEQ  ID  NO:1‑2所示的引物， 检测ULBP3基因表达量的试剂包含如SEQ  ID NO:3‑4所示的引物， 检测 ULBP5基因表达量的试剂包 含如SEQ ID NO:5‑6所示的引物。 4.肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建方法， 其特征在于， 基于QRT ‑PCR的方法分别 测定肝细胞癌患者体内MICA、 ULBP3和ULBP5基因的相对表达量， 然后代入式(1)进行风险评 估， 若分值≥0.951为肝细胞癌患者术后复发高风险， 若分值<0.951为肝细胞癌患者术后复 发低风险； 0.29795×[MICA]‑0.79165×[ULBP3]+1.28571 ×[ULBP5]    式(1) 其中， [MICA]为MICA基因的相对表达量； [ULBP3]为ULBP3基因的相对表达量； [ULBP5]为ULBP5基因的相对表达量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114277155 A 2肝细胞癌患者术后复发预测模型的构建 方法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学和医学诊断技术领域， 具体地说， 涉及一种肝细胞癌患者 术后复发预测模型的构建方法。 背景技术 [0002]肝细胞癌是全球常见的恶性肿瘤之一， 其病死率和死亡率依然很高。 尽管近年来 在肝细胞肝癌治疗方面 发展迅速， 然而， 对于这种致死性疾病的预后诊断方法依然较少。 目 前， 手术切除手术凭借其术中低死亡率的特点已经成为治疗HCC的最为安全的一种治疗手 段。 然而， 高复发率依然是术后死亡 的一个主要原因， 会导致肝癌患者的总体预后不佳。 因 此， 找到新的标记物用于预测肿瘤的复发， 则可以在临床实践中指导 我们对患者进行危险 分层、 采取个 体化监测并有针对性的进行干预。 [0003]NK细胞是固有免疫系统中重要的效应细胞， 执行免疫清除和免疫监视功能， 是机 体抵御入侵的病原体和肿瘤细胞的第一道防线。 NK细胞在肝脏内高度富集， 占肝内淋巴细 胞的30％～50％， 是外周血中占比的2～5倍。 肝脏内NK细胞的细胞毒性和产生细胞因子的 能力均高于外周血NK细胞， 而且部分具有独特的免疫表型和功能特征。 NKG2D是一种C型凝 集素受体， 是NK细胞重要的激活受体， 它可识别一系列亲和力不同、 结构多样的配体， 包括 MHC‑Ⅰ类分子相关分子A/B(MICA/B)及6种U L16结合蛋白(U LBP1‑6)。 NKG2DL一般在正 常的细 胞中不表达， 常表达于病毒感染细胞， 及肝癌、 胰腺癌、 结肠癌、 肺癌、 黑色素瘤、 神经母细胞 瘤等肿瘤细胞中。 这些配体均能与NKG2D结合， 激活下游级联信号转导， 在抗肿瘤免疫应答 过程中起重要作用。 [0004]已有研究证实NKG2DL在肝癌细胞中表达并与预后相关。 2012年Kamimura等研究发 现ULBP1主要表达于发育不良结节(dysplastic  nodule， DN)、 高分化和中度分化HCC的肝癌 细胞， 而不表达于低分化HCC的癌细胞； 且ULBP1表达阴性的HCC患者无复发生存时间明显 短 于ULBP1阳性表达的HCC患者。 而2021年Cadoux等研究发现ULBP1和其它配体MICA、 MICB、 ULBP2均在肝癌中高表达， 且它们的表达与肿瘤的分级和低分化(low  levels of  differentiation)呈正相关， MICA、 MICB、 ULBP1、 ULBP2高表达的患 者预后差且容易发生早 期复发。 这 提示肝癌中NKG2D配 体的表达和患者 早期复发之间的关系仍然存在争议。 发明内容 [0005]本发明旨在探讨MICA、 MICB及ULBP1 ‑6等NKG2D配体在肝细胞癌中的表达， 并评估 与预后和临床因素的关系， 并进一 步基于NKG2D配 体构建预测肝细胞癌早期复发的模型。 [0006]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供用于预测肝细胞癌患者术后 复发的 生物标记物， 其为肝细胞癌患者体内MICA和/或ULBP3基因的相对表达量； MICA基因表达量 与术后复发的可能性呈正相关， ULBP3基因表达量与术后复发的可能性呈负相关。 [0007]第二方面， 本发明提供检测MICA、 ULBP3和/或ULBP5基因表达量的试剂在制备肝细 胞癌患者术后复发的评价试剂中的应用。说　明　书 1/10 页 3 CN 114277155 A 3