(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210110300.X (22)申请日 2022.01.29 (66)本国优先权数据 202110183968.2 2021.02.10 CN (71)申请人 北京欣安诚科技有限公司 地址 100075 北京市西城区登莱胡同4 号11 幢310-1室 (72)发明人 崔虹　 (74)专利代理 机构 北京百欧知识产权代理事务 所(普通合伙) 11930 专利代理师 吴泳历 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01) C07K 14/00(2006.01) C07K 19/00(2006.01)C12N 15/11(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 25/14(2006.01) A61P 25/16(2006.01) A61P 25/24(2006.01) (54)发明名称 一种DAPK 1磷酸化底物的人工小分子干扰肽 及其制药用途 (57)摘要 本申请“一种DAPK1磷酸化底物的人工小分 子干扰肽及其制药用途 ”， 涉及小分子多肽类药 物研发领域， 所提供的小分子多肽可用于制备预 防和治疗缺血性卒中药物， 以及基于相同机制的 如脑卒中， 创伤性脑损伤， 脊髓损伤， 新生儿缺氧 缺血性脑病， 抑郁症和自闭症、 神经系统退行性 疾病如多发性硬化症， 阿尔茨海默氏病， 肌萎缩 侧索硬化， 帕金森病， 亨 廷顿病等。 权利要求书3页 说明书20页 附图3页 CN 114605497 A 2022.06.10 CN 114605497 A 1.一种DAPK1磷酸化底物的人工小分子干扰肽， 其特征在于， 其氨基酸序列如SEQ  ID  NO.1， SEQ ID NO.2、 SEQ ID NO.3、 SEQ ID NO.4或SEQ  ID NO.5所示。 2.一种DAPK1磷酸化底物的人工小分子干扰肽， 其特征在于， 其具有以下(A)或(B)所示 的氨基酸基序： (A)XXX(R/K)(R/K)(R/K)(R/K)X2(S/T/A)X1  XXX； (B)XXX(R/K)(R/K)(R/K)X2(R/K)(S/T/A)X1  XXX 其中每个X可以独立 地选自任何氨基酸或无氨基酸； X1为极性氨基酸， 选自天冬酰胺(N)， 半胱氨酸(C)， 谷氨酰胺(Q)， 丝氨酸(S)或苏氨酸 (T) X2为非极性氨基酸， 选自丙氨酸(A)， 异亮氨酸(I)， 亮氨酸(L)， 甲硫氨酸(M)和缬氨酸 (V)； 其中R/K指该位置上 可任意地采用精 氨酸(R)或赖氨酸(K)； 其中S/T/A指该位置上 可任意地采用丝氨酸(S)、 苏氨酸(T)或丙氨酸(A)； 优选地， 所述人工小分子干扰肽 的氨基酸序列还与SEQ  ID NO.1， SEQ  ID NO.2或SEQ   ID NO.3所示的氨基酸序列中的至少一个相比差异 不多于2个氨基酸， 即具有至少8 5％的一 致性； 优选地， 所述人工小分子 干扰肽， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.6‑54任一所示； 优选地， 所述人工小分子干扰模拟肽， 其结构为订书肽或环肽， 如： 首尾成环(酰胺键)， 侧链成环， 硫酯键成环， 内酯键成环， Se ‑Cys和Se‑Cys间氧化成环， 或二硫键的环肽。 3.权利要求1 ‑2任一所述的人工小分子 干扰肽的反向多肽或D型逆反肽或衍 生肽， 所述反向多肽与人工小分子 干扰肽相比， 肽链中氨基酸的顺序改为从C端到N端。 所述D型逆反肽与所述人工小分子干扰肽相比， 是所述人工小分子干扰肽中的每个L ‑ 氨基酸残基被其对应的D型氨基酸替换， 其氨基酸序列是反转的同时其侧链的原始空间方 向和手性与所述人工小分子干扰肽相同， 即保持与所述人工小分子干扰肽相似的侧链拓扑 结构； 所述衍生肽是所述的人工小分子干扰肽中的任一个或多个氨基酸替换成其对应的D型 氨基酸或高氨基酸而得。 4.一种多聚肽， 其特征在于， 是两条以上小分子肽以同向并联方式聚合构 成， 其中的每 个小分子肽的C端游离， 所有 小分子肽的N端聚集在一 起用于与递送载体连接； 所述小分子肽选自权利要求任一所述的人工小分子干扰肽， 所述的反向多肽、 所述的D 型逆反肽， 或所述的衍 生肽。 5.一种融合多肽， 其特征在于， 是在小分子肽的N末端或C末端融合一种或多种递送载 体构成； 所述小分子肽选自任一所述的人工小分子干扰肽， 所述的反向多肽、 所述的D型逆反 肽， 或所述的衍 生肽； 优选地， 所述的多聚肽或所述的融合多肽， 其特征在于， 所述递送载体选自穿膜肽、 配 体， 受体蛋白转 导结构域(PTD)、 抗体或高分子聚合物； 所述穿膜肽选自阳离子型细胞穿膜肽、 两亲型细胞穿膜肽、 疏水型细胞穿膜肽或合成 型细胞穿膜肽；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114605497 A 2所述高分子聚合物选自聚 乙二醇(PEG)、 聚乳酸， 聚Lactide ‑co‑Glycolide， 聚 乙醇酸， 聚己酸内酯， 聚环氧乙烷， 聚二噁烷酮， 聚丙烯富马酯， 三亚甲基碳酸酯， 聚酯酰胺环氧乙 烷， 酯酰胺， β ‑羟基苯丙酸酯， α ‑羟基酸， 聚羟基烷酸， 多聚羟基丁酸， 聚酰亚胺 碳酸盐， 聚亚 安酯， 聚酸酐， 透明质酸， 甲壳胺， 纤维素， 明胶， 胶原蛋白； 优选地， 所述阳离子型细胞穿膜肽选自S eq.ID No.55至Seq.ID  No.72所示的氨基酸序 列组成的组； 所述两亲型细胞穿膜肽选自Seq.ID  No.73至Seq.ID  No.81所示的氨基酸序列组成的 组； 所述疏水型细胞穿膜肽选自Seq.ID  No.82至Seq.ID  No.85所示的氨基酸序列组成的 组； 所述合成型细胞穿膜肽具有Seq.ID  No.86所示的氨基酸序列； 优选地， 所述的融合多肽， 其特征在于,所述人工小分子干扰肽具有SEQ  ID NO.1‑3、 SEQ ID NO.6‑54任一所示的氨基酸序列； 所述穿膜肽具有Seq.ID  No.55‑Seq.ID No.86任 一所示的氨基酸序列； 优选地， 所述的融合多肽， 其特征在于,其氨基酸序列如Seq.ID  No.87‑Seq.ID No.96 任一所示。 6.一种人工制备的核酸分子， 其特征在于， 其编码小分子多肽， 所述小分子肽选自权利 要求任一所述的人工小分子 干扰肽， 所述的反向多肽。 7.一种表达载体， 其特 征在于， 装载有前述任一核酸分子 。 8.一种表达系统， 其特 征在于， 为细胞系或无细胞体系表达系统， 含有前述载体。 9.一种表达产物， 其特征在于， 由权利要求14所述的表达系统表达， 其主要成分为小分 子多肽； 所述小分子肽选自权利要求1 ‑3任一所述的人工小分子干扰肽， 权利要求5所述的 反向多肽。 10.一种药物， 其特征在于， 含有多肽 分子以及药学可接受 的杂质、 辅料、 溶剂、 保护剂、 佐剂、 载体和/或赋 形剂； 其中所述多肽分子为： (1)小分子肽， 所述小分子肽选自任一所述的人工小分子干扰肽， 所述的反向多肽、 所 述的D型逆反肽， 或所述的衍 生肽或 (2)小分子肽的修饰产物， 所述小分子肽选自任一所述的人工小分子干扰肽， 所述的反 向多肽、 所述的D型逆反肽， 或所述的衍 生肽； ； 所述 修饰指以下一种或多种： N末端、 C末端修饰、 标记、 环化、 脂化、 N ‑甲基化、 豆蔻酰化和棕榈酰化、 糖基化、 生物素 化、 PEG修饰、 荧 光标记； 优选地， 所述的药物， 其特征在于， 剂型为： 吸入气雾剂、 口服剂、 静脉内给药、 动脉内给 药、 颅内给药、 腹膜内给药、 鼻内给药、 肌肉内给药、 皮下给药、 滑膜(腔)内给药、 胸骨内给 药， 脊椎内给 药制剂； 优选地， 小分子肽的的制药用途， 其特征在于， 所述小分子肽选自权利要求1 ‑3任一所 述的人工小分子干扰肽， 权利要求5所述的反向多肽、 权利要求6所述的D型逆反肽， 或权利 要求7所述的衍 生肽； 所述制药用途是指用于制备治疗或预防与兴奋性氨基酸毒性机制相关的疾病的药物， 所述疾病包括但不限于脑卒中、 创伤性脑损伤、 脊髓损伤、 新生儿缺氧缺血性脑病、 神经系权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114605497 A 3