(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210116178.7 (22)申请日 2022.01.29 (71)申请人 上海伯杰医疗科技股份有限公司 地址 201415 上海市奉贤区沪杭公路158 8 号3号楼1302、 1303、 1304、 1305、 1306、 1307、 1309室 (72)发明人 沈林　朱兆奎　张春雷　柴燕群　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 王闯 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物 组及应用 (57)摘要 本发明涉及基因工程技术领域， 尤其是涉及 用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组及 应用。 本发 明提供的引物组的扩增区域包含包括 PB1、 PB2、 PA、 HA、 NP、 NA、 MP和NS在内的至少8个 H7N9病毒全基因组 中的不同区域， 将 扩增得到的 8节段基因组进行拼接即可得到H7N9病毒的全基 因组， 由于不同亚型的H 7N9病毒之间往往在每一 节段基因组序列上的差异并不明显， 因此， 经过 分区域扩增再拼接的方法， 能够对多种不同亚型 的H7N9病毒实现扩增。 权利要求书3页 说明书13页 序列表18页 附图6页 CN 114457194 A 2022.05.10 CN 114457194 A 1.一种用于H7N9病毒全基因组扩增的通用型引物组， 其特征在于， 所述引物组包括至 少8个分别扩增H7N9病毒全基因组不同区域的引物对， 所述不同区域包括PB1、 PB2、 PA、 HA、 NP、 NA、 MP和NS。 2.根据权利要求1所述的引物组， 其特征在于， 扩增PB1区域的引物对选自引物对1、 引 物对2或引物对3中的至少一种； 扩增PB2区域的引物对选自引物对4、 引物对5或引物对6中 的至少一种； 扩增PA区域的引物对选自引物对7、 引物对8或引物对9 中的至少一种； 扩增 HA 区域的引物对选自引物对10、 引物对11或引物对12 中的至少一种； 扩增NP区域的引物对选 自引物对13和/或引物对14； 扩增NA区域的引物对选自引物对15和/或引物对16； 扩增MP区 域的引物对选自引物对17、 引物对18或引物对19 中的至少一种； 扩增NS区域的引物对选自 引物对20和/或引物对21。 3.根据权利要求2所述的引物 组， 其特征在于， 所述PB1区域引物对1上游引物的特征序 列包括： ATGGATGTCAATCCGACT； 所述PB1区域引物对1下游引物的特征序列包括： CCAGATTGCTCAAGTTTC和/或CCAGACTGCTCAAGTTTC； 所述PB1区域引物对2上游引物的特征序 列包括： TCGTGTATTTTGTAGAAGC和/或TCGTGTATTTCGTAGAAGC； 所述PB1区域引物对2下游引物 的特征序列包括： ACTCCAAAACTGGGCAACT； 所述PB1区域引物对3上游引物的特征序列包括： GCTTTTTCTACCGCTATGG ； 所述PB1区域引物对3下游引物的特征序列包括： CACTATTTTTGCCGTCTGA； 所述PB2区域引物对4上游引物的特征序列包括： ATGGAAAGAATAAAAGAACT； 所述PB2区域 引物对4下游引物的特征序列包括： TGATACAGTTGCTCTTCTAA、 TGACACAGTTGCTCTTCTAA、 TGATACTGTTGCTCTTCTAA、 TGACACTGTTGCTCTTCTAA、 TGATACAGTTGCCCTTCTAA、 TGACACAGTTGCCCTTCTAA、 TGATACTGTTGCCCTTCTAA或TGACACTGTTGCCCTTCTAA中至少一种； 所 述PB2区域引物对5 上游引物的特征序列包括： AGAGTTTAATTATTGCTGCT； 所述PB2区域引物对 5下游引物的特征序列包括： TGTTTCACTAACCTCTTCAG、 TGTTTCACTAACCTCCTCAG、 TGTTTCACTAACCTCTTCGG或TGTTTCA CTAACCTCCTCGG中至少一种； 所述PB 2区域引物对6 上游引 物的特征序列包括： CGTTTCTTAAGGGTTCGAG、 CGTTTCTTGAGGGTTCGAG、 CGTTTCTTAAGGGTCCGAG 或CGTTTCTTGAGGGTCCGAG中至少一种； 所述PB2区域引物对6下游引物的特征序列包括： TTAATTGATGGCCATCCGA； 所述PA区域引物对7上游引物的特征序列包括： ATGGAAGACTTTGTGCGA； 所述PA区域引物 对7下游引物的特征序列包括： CAATGCAGCCGTTCGGTT； 所述PA区域引物对8上游引物的特征 序列包括： ACCGAACTTCTCCAGCCT； 所述PA区域引物对8下游引物的特征序列包括： AGTTGAAAGTCATCCATG ； 所述PA区域 引物对9上游 引物的 特征序列包括 ： AGAGCTACTGAATATATAA、 AGAGCTACTGAGTATATAA、 AGAGCTACTGAATACATAA、 AGAGCTACTGAGTACATAA、 AGGGCTACTGAATATATAA、 AGGGCTACTGAGTATATAA、 AGGGCTACTGAATACATAA或AGGGCTACTGAGTACATAA中至少一种； 所述PA区域引物对9下游引物 的特征序列包括： TGC CACAACTATCTTAGTG； 所述HA区域引物对10上游引物的特征序列包括： ATGAACACTCAAATCCTG； 所述HA区域引 物对10下游引物的特征序列包括： ATTGGGATTTAGTAGTAG、 ATTGGGATTTAGTATTAG、 ATTGGGATTTAGCAGTAG或ATTGGGATTTAGCATTAG中至少一种； 所述HA区域引物对11上游引物的 特征序列包括： GAGCGAGACCACAAGTTAA； 所述HA区域引物对11下游引物的特征序列包括：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114457194 A 2ATTGCTATCAAGAGTTCAG、 ATTGCTATCAAGAGTTCTG、 ATTGCTACCAAGAGTTCAG或 ATTGCTACCAAGAGTTCTG中至少一种； 所述HA区域引物对12上游引物的特征序列包括： TGTGATAAAGTGGACCAGAGAT和/或TGTGATAAATTGGACCAGAGAT； 所述HA区域引物对12下游引物 的特征序列包括： T TATATACA AATAGTGCAC CGC； 所述NP区域引物对13上游引物的特征序列包括： ATGGCGTCTCAAGGCACCAAACGA； 所述NP 区域引物对13下游引物的特征序列包括： GCATTCCCAGGATTTCTGCTTTCT和/或 GCATTCCCAGGATTTCTGCTCTCT； 所述NP区域引物对14上游引物的特征序列包括： ATCAAGTGCGAGAAAGCAGAAATCCT、 ATCAAGTGCGAGAAAGCAGAAATCCT、 ATCAAGTGCGAGAGAGCAGAAACCCT或ATCAAGTGCGAGAGAGCAGAAA CCCT中至少一种； 所述NP区域引 物对14下游引物的特 征序列包括： TCA ATTGTCATACTC CTCTGCAT TGT； 所述NA区域引物对15上游引物的特征序列包括： ATGAATCCAAATCA GAAGA； 所述NA区域引 物对15下游引物的特征序列包括： AGTCAGAGA CTCCCATTTT和/或AGTCAGAGA CTCCCATTTC； 所述 NA区域引物对16上游引物的特征序列包括： CATACTAAGAACACAGGAATC和/或 CATACTAAGAACACAGGAGTC； 所述NA区域引物对16下游引物的特征序列包括： TTAGAGGAAGTACTCTAT TTT； 所述MP区域引物对17上游引物的特征序列包括： ATGAGCCTTCTAACCGAGGTCG和/或 ATGAGTCTTCTAACCGAGGTCG； 所述MP区域引物对17下游引物的特征序列包括： TCTGCTCACAAGTGGCACATAC； 所述MP区域引物对18上游引物的特征序列包括： ATACAAGAAACTGAAGAGGGAAATG和/或GTACAAGAAACTGAAGAGGGAAATG； 所述MP区域引物对18下 游引物的特征序列包括： CA CAATATCAAGTGCAATATCCCAA和/或CACAATATCAGGTGCAATATCCCAA； 所述MP区域引物对19上游引物的特征序列包括： ATGGTACTAGCCAGTACTAC和/或 ATGGTACTAGCCAGCACTAC； 所述MP区域引物对19下游引物的特征序列包括： TTACTTCAGCTCTATGT TGAC； 所述NS区域引物对20上游引物的特征序列包括： AGCAAAAGCAGGGTGACAAA和/或 AGCGAAAGCAGGGTGACAAA； 所述NS区域引物对20下游引物的特征序列包括： TATCATTCCAT