(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210116051.5 (22)申请日 2022.01.29 (71)申请人 中南林业科技大 学 地址 410004 湖南省长 沙市韶山 南路498号 申请人 湖南工业大 学 (72)发明人 江南　谭晓风　徐艳　周俊琴　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 代理人 袁靖 (51)Int.Cl. C12N 15/55(2006.01) C12N 9/22(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) (54)发明名称 油茶自交不亲和基因S-RNase、 SNP位点及应 用 (57)摘要 本发明公开了一种油茶自交不亲和基因S ‑ RNase、 SNP位点及应用。 本发明提供存在于油茶 S‑RNase基因组序列编码区的32个SNP错义突变 位点。 引物特异扩增S ‑RNase基因的编码区 EXON1、 EXON2、 EXON3、 和 EXON4片段， EXON片段分 别与对应编码区的SNP位点的探针孵育， 得到荧 光标记的纳米磁珠 ‑SNP探针‑EXON片段的复合 物， 通过对复合物进行信号检测获得油茶品种S ‑ RNase基因32个SNP位点的基因型信息。 利用S ‑ RNase基因32个SNP位点的基因型信息可以在苗 期预测油茶林地配置品种授粉亲和性状表型， 有 效提高油茶新造林地品种配置选择效率和油茶 单位面积产量。 权利要求书2页 说明书12页 序列表15页 附图3页 CN 114410668 A 2022.04.29 CN 114410668 A 1.油茶自交不亲和基因S ‑RNase， 其CDS序列为： SEQ  ID NO.1， 基因组序列为： SEQ  ID  NO.2。 2.根据权利要求1所述的油茶自交不亲和基因S ‑RNase， 其特征在于， 该基因在油茶自 交雌蕊中特异 性表达； 通过降解花粉 管的RNA和解聚花粉 管的细胞骨架抑制花粉 管的生长， 导致油茶自交不亲和现象发生， 最终油茶不能正常形成果实和种子， 进 而降低油茶座 果率。 3.油茶自交不亲和基因S ‑RNase的SNP位 点， 其特征在于， 位置和多态性信息如下： 4.权利要求3所述的油茶自交不亲和基因S ‑RNase的SNP位点的应用， 其特征在于， 包括权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114410668 A 2以下至少一种： (1)鉴定油茶品种所含S ‑RNase基因； (2)鉴定油茶林地配置品种授粉亲和性状表型； (3)早期预测油茶新造林地油茶品种配置授粉亲和性状表型； (4)油茶新造林地科 学配置品种； (5)油茶种质资源鉴定和改良； 父本和母本基因S ‑RNase的32个SNP位点的基因型等于或超过24个相同， 授粉表现为不 亲和性状表型； 父本和母本基因S ‑RNase的32个SNP位点的基因型等于或低于7个相同， 则授 粉表现为亲和性状表型。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 采用引物进行油茶自交不亲和基因S ‑ RNase各EXON区段扩增， 然后采用针对基因S ‑RNase的SNP多态性 位点设计的探针进行杂交。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 引物特异扩增S ‑RNase基因的编码区 EXON1、 EXON2、 EXON3、 和EXON 4片段， EXON片段分别与对应编码区的SNP位 点的探针孵 育。 7.根据权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 孵育后得到荧光标记的SNP探针 ‑EXON片段 的复合物， 通过对复合物进行信号检测获得油茶 品种S‑RNase基因32个SNP位点的基因型信 息。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 引物序列： 包括SEQ ID NO.67～SEQ ID NO.72组成的引物对， 探针序列： 包括对应32个位 点的SNP探针序列SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.6 6。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 其中引物对SEQ ID NO.67 ‑68用于扩增EXON1+intron1+EXON2区域； 引物对SEQ ID NO.69‑70用于扩增EXON3区域和引物对SEQ ID NO.71 ‑72用于扩增EXON 4区域。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114410668 A 3