(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210112676.4 (22)申请日 2022.01.29 (71)申请人 龙岩学院 地址 364012 福建省龙岩市东肖北路1号 (72)发明人 魏春华　刘建奎　李佳睿　徐叶　 戴爱玲　 (74)专利代理 机构 福州君诚知识产权代理有限 公司 35211 代理人 戴雨君 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的荧光定量检测 引物和探 针组 (57)摘要 本发明公开了鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的 荧光定量检测引物和探针组， 鉴定美洲型PRRSV 的引物和探针序列为A M‑F、 AM‑R、 AM‑P， 鉴定欧洲 型PRRSV的引物和探针序列为EU ‑F、 EU‑R、 EU‑P。 本发明根据美洲型和欧洲型PRRSV  ORF6基因保 守序列设计特异性引物和探针， 建立了可以同时 检测检测欧洲型和美洲型PRRSV的双重实时荧光 定量PCR方法， 标准品在1 ×109copies/μL~1× 101copies/μL浓度范围内具有良好的线性关 系， 最低可检测到10copies/μL的标准品阳性质 粒， 使用本发明引物和探针的检测方法， 其特异 性强， 重复性好， 对不同基因型PRRSV快速、 灵敏 检测具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 114292962 A 2022.04.08 CN 114292962 A 1.鉴别美洲型和欧洲型PR RSV的荧光定量检测引物和探针组， 其特 征在于， 鉴定美洲型PR RSV的引物和探针序列如下： AM‑F： CCGCRSGST TTCATCCGA； AM‑R： ARTGYGC CGTTRACYGTAG AM‑P： FAM‑AACCACGCATTTGTCGTCCGGC‑BHQ1 鉴定欧洲型PR RSV的引物和探针序列如下： EU‑F： TTYYAGATGCAGAYTGTGT TGCC； EU‑R： GTATSC YYGGTTACCAGACGC； EU‑P： VIC‑CCGGCGATACAT TCTGGCCCCT‑BHQ1。 2.根据权利要求1所述的鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的荧光定量检测引物和探针组， 其 特征在于， 用于扩增包 含荧光定量片段的PCR引物序列如下： 美洲型PR RSV标准品引物序列如下： AM‑PF： ACGCCARTRATGATATATGC； AM‑PR： CAATCAGTGC CAYTCACCA； 欧洲型PR RSV标准品引物序列如下： EU‑PF： CACCYATAATGATATAYGC CC； EU‑PR： GGCARCATRA ACTCRACCT。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292962 A 2鉴别美洲型和欧洲型P RRSV的荧光定量 检测引物和探针组 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体涉及鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的荧光定量检测 引物和探针组。 背景技术 [0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine  productive  and respiratory  syndrome， PRRS) 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒( Porcine reproductive  and respiratory  syndrome， PRRSV)引起的一种高度接触性传染病。 现已遍布世界各地， 给全世界的养猪业造成了巨大 的经济损失。 PRRSV依据遗传 进化的差异可分为两个基因型， 分别是以LV毒株为代表的欧洲 型和以VR ‑2332毒株为代表的美洲型。 自1996年郭宝清等人首次从流产胎儿中分离出 PRRSV， 我国PRRSV流行以美洲型为主， 呈现多种亚型并存的局面。 1997年孙颖杰等在国内猪 分离到欧洲型PRRSV， 此后， 欧洲型PRRSV在我国呈现散发状态， 且有上升趋势。 目前 我国分 离到的欧洲型PRRSV均属于Subtype Ⅰ亚型， 致病力低， 但国外已有高毒力欧洲 型PRRSV毒株 的报道， 因此， 对两种基因型 快速可靠的检测 和鉴别对于PR RSV监测十分重要。 发明内容 [0003]本发明的目的在于提供一种鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的荧光定量检测引物和探 针组。 [0004]为了实现上述目的， 本发明采用的技 术方案如下： [0005]鉴别美洲型和欧洲型PRRSV的荧光定量检测引物和探针组， 其中， 鉴定美洲型 PRRSV的引物和探针序列如下： [0006]AM‑F： CCGCRSGST TTCATCCGA； [0007]AM‑R： ARTGYGC CGTTRACYGTAG [0008]AM‑P： FAM‑AACCACGCATTTGTCGTCCGGC‑BHQ1 [0009]鉴定欧洲型PR RSV的引物和探针序列如下： [0010]EU‑F： TTYYAGATGCAGAYTGTGT TGCC； [0011]EU‑R： GTATSC YYGGTTACCAGACGC； [0012]EU‑P： VIC‑CCGGCGATACAT TCTGGCCCCT‑BHQ1。 [0013]进一步地， 本发明还提供了用于扩增包含荧光定量片段的PC R引物， 用于标准品的 制备， 其中， 美洲型PR RSV标准品引物序列如下： [0014]AM‑PF： ACGCCARTRATGATATATGC； [0015]AM‑PR： CAATCAGTGC CAYTCACCA； [0016]欧洲型PR RSV标准品引物序列如下： [0017]EU‑PF： CACCYATAATGATATAYGC CC； [0018]EU‑PR： GGCARCATRA ACTCRACCT。 [0019]本发明根据美洲型和欧洲型PRRSV  ORF6基因保守序列设计特异性引物和探针， 通说　明　书 1/6 页 3 CN 114292962 A 3