(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210114498.9 (22)申请日 2022.01.30 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114480709 A (43)申请公布日 2022.05.13 (73)专利权人 北京大学现代农业研究院 地址 261000 山东省潍坊市峡山 生态经济 开发区怡峡街197号6号楼 (72)发明人 陈时盛　李洪娜　王桂平　华蕾　 沈涛　李洪雨　姜登基　罗静　 白升升　 (74)专利代理 机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 1 1240 专利代理师 路秀丽(51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/6827(2018.01) 审查员 姜紫耀 (54)发明名称 检测小麦抗叶锈病基因Lr47的分子标记、 检 测方法及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种检测小麦抗叶锈病基因 Lr47的分子标记、 检测方法及其应用。 本发明借 助于经过诱导的小麦 ‑拟斯卑尔脱山羊草抗叶锈 病短片段易位系， 结合小麦和拟斯卑尔脱山羊草 的参考序列， 开发了与抗叶锈病基因Lr47紧密连 锁的分子标记Pku1176。 利用该分子标记可以准 确快速的检测不同小麦背景下易位的短片段7S 染色体， 实现抗叶锈病基因Lr47的早期分子辅助 选择， 提高小麦抗病育种效率。 解决了现有技术 中检测小麦抗锈病基因难度大的问题， 适用于分 子遗传育种领域。 权利要求书2页 说明书10页 序列表1页 附图3页 CN 114480709 B 2022.11.29 CN 114480709 B 1.一种检测小麦抗叶锈病基因Lr47的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括引物， 所述 引物包括SEQ ID NO： 1所示的上游引物Pku1176 ‑F和SEQ ID NO： 2所示的下游引物Pku1176 ‑ R； 所述试剂盒还 包括限制性内切酶MspI。 2.一种小麦抗叶锈病基因Lr47的检测方法， 其特 征在于， 所述检测方法包括： 对利用权利要求1所述的试剂盒进行扩增， 并对 扩增的产物进行酶切 和检测； 所述检测方法包括： a)以待测小麦的基因 组DNA为模板， 采用所述引物进行PCR扩增； b)使用所述限制性内切酶MspI对PCR扩增产物进行酶切； c)对酶切产物进行检测， 判断所述酶切产物 的碱基序列长度， 若所述碱基序列长度为 672bp， 则所述待测小麦不含所述小麦抗叶锈病基因； 若所述碱基序列长度包括300bp和372bp， 则所述待测小麦含有所述小麦抗叶锈病基 因。 3.根据权利要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述c)中， 若所述碱基序列长度包括 300bp、 372bp和672bp， 则所述待测小麦为含有所述小麦抗叶锈病基因的杂合子； 若所述碱基序列长度包括300bp、 372bp且不包括672bp， 则所述待测小麦为含有所述小 麦抗叶锈病基因的纯合子 。 4.根据权利要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述c)中的检测包括采用琼脂糖凝胶 电泳对所述酶切产物进行检测。 5.根据权利 要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述a)中的PCR扩增程序为： 94℃预变 性3min； 94℃变性3 0s， 54℃退火40s， 72℃延伸3 0s， 35个循环； 72℃延伸10mi n， 4℃保存。 6.一种易 位系小麦 育种方法， 其特 征在于， 所述育种方法包括： (1)将中国春ph1b突变体材料与携带小麦抗叶锈病基因Lr47的抗病亲本进行杂 交， 获 得F1植株； (2)所述F1植株自交获得F2植株， 在所述F2植株群体中， 选择携 带纯合ph1b突变基因， 同 时携带7S/7A染色体的杂合单株， 进行自交， 获得 F3植株； (3)利用权利要 求1所述的试剂盒、 或权利要 求2至5中任一项所述的检测方法， 对所述F3 植株及其自交后代家系的基因型进行确定， 并进行叶锈病表型鉴定， 得到携带所述小麦抗 叶锈病基因Lr47及外源7S短片段的纯合的重组体小麦； (4)将携带所述小麦抗叶锈病基因Lr47及所述外源7S 短片段的纯合的所述重组体小麦 回交转育到无抗性小麦中， 得到携带所述小麦抗叶锈病基因Lr 47及所述外源7S短片段的纯 合的易位系小麦； 其中， 所述外源7S短片段指短于所述携带小麦抗叶锈病基因Lr47的抗病 亲本中的外源7S 片段的长度的片段。 7.根据权利要求6所述的易位系 小麦育种方法， 其特征在于， 利用所述无抗性小麦对所 述重组体小麦进行多次回交后的子代进 行自交， 利用权利要求1所述的试剂盒、 或权利要求 2至5中任一项所述的检测方法进行检测， 从而得到携带所述小麦抗叶锈病基因及所述外源 7S短片段的纯合的所述 易位系小麦 。 8.根据权利要求6所述的易位系 小麦育种方法， 其特征在于， 所述携带小麦抗叶锈病基 因Lr47基因的抗病亲本包括 抗病亲本K ern Lr47。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480709 B 29.根据权利要求7所述的易位系 小麦育种方法， 其特征在于， 所述无抗性小麦包括扬麦 21。 10.权利要求1所述的试剂 盒， 或权利要求2至5中任一项所述的检测方法， 或权利要求6 至9中任一项所述的易 位系小麦 育种方法， 在所述小麦抗叶锈病基因Lr47的育种中的应用。 11.权利要求1所述的试剂盒， 或权利要求2至5中任一项所述的检测方法， 在克隆所述 小麦抗叶锈病基因、 鉴定或辅助鉴定小麦抗叶锈病表型性状、 或筛选拟斯卑尔脱山羊草抗 叶锈病品系、 或在小麦 ‑拟斯卑尔脱山羊草抗叶锈病种质资源及其衍生品种或品系中的应 用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480709 B 3