(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210117048.5 (22)申请日 2022.02.07 (71)申请人 博尔诚 （北京） 科技有限公司 地址 100176 北京市大兴区北京经济技 术 开发区宏达南路18号3号楼10层 (72)发明人 吴宁宁　韩晓亮　连明　王小奇　 张聪　魏闯　李永君　 (74)专利代理 机构 北京彩和律师事务所 1 1688 专利代理师 闫桑田 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6837(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于睾丸癌筛查的标志物、 探针组合物及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于睾丸癌筛查的标志 物、 探针组合物及其应用。 本发明使用所述的标 志物， 能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的 状态， 从而可以用于对外周血游离DNA的检测， 并 且本发明所述的组合物以非侵入性的方式用于 无症状人群的筛查， 降低了侵入性检测造成的危 害， 所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度， 能够实现实时监测。 权利要求书2页 说明书16页 序列表3页 CN 114703281 A 2022.07.05 CN 114703281 A 1.一种用于检测睾丸癌的标志 物， 所述标志 物对应的基因为C MAHP。 2.根据权利要求1所述的标志物， 其中， 所述标志物包含如SEQ  ID NO:1所示的核苷酸 序列， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物。 3.一种探针组合物， 所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化状态的 探针。 4.根据权利要求3所述的探针组合物， 其中， 所述探针组合物包含靶向高甲基化的所述 标志物的第一探针组合物和靶向低甲基化的所述标志物的第二探针组合物， 所述第一探针 组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的标志物区域杂交， 所述第二探针组合物用于 与经重亚硫酸盐转 化的低甲基化的标志 物区域杂交； 优选的， 所述第一探针组合物包括n个探针， 所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲 基化的标志 物区域的正 义链和/或反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， 所述第二探针组合物包括m个探针， 所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲 基化的标志 物区域的正 义链和/或反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， n和m均是1 ‑10中的任意整数； 优选的， 第n ‑1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠， 优选的， x1为0‑100中的任意 整数； 优选的， 第m ‑1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠， 优选的， x2为0‑100中的任意 整数； 进一步优选的， 所述第一探针组合物包括如SEQ  ID NO:2‑3中的一种或两种， 所述第二 探针组合物包括如SEQ  ID NO:4‑5中的一种或两种。 5.标志物在制备用于检测睾丸癌的试剂盒中的用途， 所述标志 物对应的基因为C MAHP。 6.根据权利要求5所述的用途， 其中， 所述标志物的核苷酸序列包含如SEQ  ID NO:1中 所示的序列， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物用于靶向睾丸癌的 甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物为权利要求3或4所述的探针组合物。 7.一种用于睾丸癌检测的组合物， 所述组合物包括用于检测CMAHP的甲基化状态的核 酸。 8.根据权利要求7所述的组合物， 其中， 所述标志物包含如SEQ  ID NO:1所示的核苷酸 序列。 9.根据权利要求7或8所述的组合物， 其中， 所述核酸包括权利要求3或4所述的探针组 合物； 优选的， 所述核酸包括： 引物， 所述引物为所述标志物中的至少9个核苷酸的片段， 所述片段包含至少一个CpG 二核苷酸序列； 优选的， 所述核酸还 包括： 探针， 所述探针在中等严紧或严紧条件下与所述标志物中的至少15个核苷酸片段杂 交， 所述片段包 含至少一个CpG二核苷酸序列； 优选的， 所述组合物还包括将标志物的5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试 剂；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114703281 A 2优选的， 所述用于检测标志 物甲基化的核酸还 包括： 优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。 10.一种试剂 盒， 其包含用于检测权利要求1或2所述的标志物的试剂 或者权利要求3或 4所述的探针组合物或者权利要求7 ‑9中任一项所述的组合物。 11.一种芯片， 其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组合 物或者权利要求7或8所述的组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114703281 A 3