(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 20221012120 5.X (22)申请日 2022.02.09 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114214466 A (43)申请公布日 2022.03.22 (73)专利权人 江西省农业科 学院畜牧兽医研究 所 地址 330200 江西省南昌市青云谱区南 莲 路602号 专利权人 福建省农业科 学院畜牧兽医研究 所 (72)发明人 李海琴　杨群　张帆帆　谭美芳　 康昭风　傅秋玲　曾艳兵　季华员　 黄江南　傅光华　韦启鹏　黄瑜　 谭佳　吴诚诚　方绍培　 (74)专利代理 机构 湖北创融蓝图知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 42276 专利代理师 羊淑梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (56)对比文件 CN 10838489 9 A,2018.08.10 CN 109825 650 A,2019.0 5.31 CN 110358866 A,2019.10.2 2 CN 113215326 A,2021.08.0 6 CN 103773899 A,2014.0 5.07 US 2016060716 A1,2016.0 3.03 邱思语等.鹅肾型星状病毒SYBR Gre en Ⅰ实 时荧光定量PCR方法的建立. 《中国兽医科 学》 .2020,第5 0卷(第03期), 吴双等.鸭坦布苏病毒、 鸭肠炎病毒和番鸭 细小病毒 TaqMan三重实时荧 光定量PCR检测方法 的建立与临床应用. 《江苏农业学报》 .2020,(第 03期), 孙敏华等.鸭坦布苏病毒、 产蛋下降综合征 病毒和H9亚型禽 流感病毒三重荧 光定量PCR检测 方法的建立. 《广东畜牧兽医科技》 .2017,(第04 期), 审查员 侯玮婷 (54)发明名称 新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧光 定量PCR检测引物探 针组、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明属于病毒检测技术领域， 尤其涉及新 型鹅星状病毒(GoAstV)和鸭坦布苏病毒(DTMUV) 多重荧光定量PCR检测引物探针组、 试剂盒及应 用。 本申请中分别针对D TMUV的E基因与GoAstV的 ORF1b基因， 设计 特异性引物和探针， 经优 化反应 条件， 建立了同一体系中同时检测D TMUV、 GoAstV 的荧光定量PCR方法。 该方法具有特异、 敏感、 高 效的优点。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图8页 CN 114214466 B 2022.07.22 CN 114214466 B 1.一种用于检测鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒的试剂 盒， 其特征在于， 包括试剂2 ×AceQ  Qpcr Probe Master Mix、 MoCl3、 50×ROX Reference  Dye 1和鸭坦布苏病毒的上、 下游引 物、 鸭坦布苏病毒特异性探针： 上游引物： 5 ’ ‑TTGTTGTCCTTGCTGAAGGC‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CATTGGGAGGACCGAAGAGT‑3’； 鸭坦布苏病毒特异性探针： 5 ’ ‑CTGTCGCG GCACGAGCTCGT ‑3’； 以及鹅星状病毒的上、 下游引物、 鹅星状病毒特异性探针： 上游引物： 5 ’ ‑CTGCACAAGTTGGTTGGACA‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CATCATAACGCGTCCAGTCC‑3’； 鹅星状病毒特异性探针： 5 ’ ‑ACCTGTCACCACCACCAATGAGCC‑3’。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述MoCl3的浓度为2.0m mol‑3.0mmol。 3.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述鸭坦布苏病毒特异性探针在5 ’端标 记6‑FAM荧光基团， 在3 ’端标记BHQ1淬灭基团； 所述鹅星状病毒特异性探针在5 ’端标记CY5荧光基团， 在3 ’端标记BHQ1淬灭基团。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114214466 B 2新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧光定量PCR检测引物 探针组、 试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明属于病毒检测技术领域， 尤其涉及 新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧 光定量PCR检测引物探针组、 试剂盒及应用。 背景技术 [0002]2017年以来， 华东地区多个鹅场暴发了以雏鹅痛风为主要临床特征的疾病， 主要 感染4～16日龄的雏鹅， 导致约2％～20％的死亡率， 死亡鹅表现为肾发白肿胀、 胸腹膜及心 表面、 输尿管中存在大量的尿酸盐沉积， 给养鹅业造成了很大的损失。 经分离鉴定发现， 该 病是由一种星状病毒感染所导致， 该毒株与以往报道的禽星状病毒具有很大 的差异， 其全 基因组同源性为46.5％～62.0％， 编码衣壳蛋白的ORF2基因氨基酸序列的同源性仅为 27.3％～57.0％， 与禽星状病毒属的其他代表性毒株的遗传距离较远， 是一种 新发的星状 病毒。 [0003]2010年4—6月份， 中国福建、 浙江、 江苏、 安徽、 山东等地的产蛋鸭相继爆发以产蛋 下降为特征的一种新病， 该病发病急、 传播快， 发病对象主要集中于各个产蛋阶段的麻鸭和 樱桃谷种鸭。 鸭发病后， 产蛋率从90％—95％下降到10％以下， 甚至绝产。 其剖检变化主要 表现为卵泡出血、 破裂和 卵黄性腹膜炎， 死亡率在1％—5％。 研究证明引起该病的病原 为黄 病毒科黄病毒属的坦布苏病毒(Tembusuvirus， TMUV)， 该病暂命名为坦布苏病毒病 (Tembusu  virus disease， TMUVD)。 有研究表明， 鸭坦布苏病 毒也会感染鹅， 造成鹅产蛋下 降， 建立新型鹅星状病毒和坦布苏病毒的多重荧光定量PCR检测方法对水禽疫病防控具有 重要意义。 [0004]目前已有研究关于坦布苏病毒荧光定量PCR方法的建立和新型鸭细小病毒SYBR   GreenΙ荧光定量P CR检测方法的建立， 但是新型鹅星状病毒和鸭坦布苏的多重荧光定量PCR 方法还未 见报道。 发明内容 [0005]针对现有技术存在的问题， 本发明提供了新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒多重荧 光定量PCR检测引物探针组、 试剂盒及应用， 目的在于解决现有技术中的一部 分问题或至少 缓解现有技 术中的一部分问题。 [0006]一种快速检测新型鹅星状病毒和鸭坦布苏病毒的多重引 物和探针， 包括： 鸭坦布 苏病毒的上、 下游引物分、 鸭坦布苏病毒特异性探针和新型鹅星状病毒的上、 下游引物、 新 型鹅星状病毒特异性探针； [0007]所述鸭坦布苏病毒的上、 下游引物分、 鸭坦布苏病毒特异性探针为： [0008]上游引物： 5 ’ ‑TTGTTGTCCTTGCTGAAGGC‑3’(SEQ ID NO.1) [0009]下游引物： 5 ’ ‑CATTGGGAGGACCGAAGAGT‑3’(SEQ ID NO.2) [0010]鸭坦布苏病毒特异性探针： 5 ’ ‑CTGTCGCG GCACGAGCTCGT ‑3’(SEQ ID NO.3)说　明　书 1/7 页 3 CN 114214466 B 3