(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221012081 1.X (22)申请日 2022.02.09 (71)申请人 国科宁波生命与健康产业研究院 地址 315016 浙江省宁波市北郊路159号 申请人 中国科学院大学宁波华美医院 (72)发明人 毛瑞　桂峥　蔡挺　蔡昊　 (74)专利代理 机构 上海硕力知识产权代理事务 所(普通合伙) 31251 代理人 王法男 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种检测斑点热群立克次体的CDA引物组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测斑点热群立克次体 的CDA引物组、 试剂盒及其应用。 所述CDA引物组 为针对斑点热群立克次体的保守区片段扩增的 引物组， 为引物对R ‑F2/R‑R2和引物对R ‑MF/R‑ MR； 其中， R ‑F2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示， R‑R2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； R ‑MF 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， R ‑MR的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.4所示。 本发明提供的方法 或试剂盒无需昂贵的仪器、 也无需复杂的操作就 可完成对斑点热群立克次体的快速准确检测。 本 发明所提供的可视化试剂盒可敏感、 特异地检测 斑点热群立克次体感染， 操作简便， 可作为疫情 现场的初级卫 生防疫和病原筛查。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 114250311 A 2022.03.29 CN 114250311 A 1.一种非疾病诊断目的的检测斑点热群立克次体的CDA引物组， 其特征在于： 所述CDA 引物组为以下两对引物， 引物对R‑F2/R‑R2， 其中， R ‑F2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， R ‑R2的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2所示； 引物对R‑MF/R‑MR， 其中， R ‑MF的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， R ‑MR的核苷酸序列如 SEQ ID NO.4所示。 2.一种检测斑点热群立克次体的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒包括权利要求1所述 的CDA引物组。 3.如权利要求2所述的一种检测斑点热群立克次体的试剂盒， 其特征在于： 所述CDA引 物组中， 引物R ‑F2与R‑R2的浓度均为0.2 ～0.4 μM， 引物R ‑MF与R‑MR的浓度均为1～ 2 μM。 4.如权利要求2所述的一种检测斑点热群立克次体的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒 还包括Bst聚合酶、 CDA反应缓冲液、 超纯 水、 以及显色剂。 5.如权利要求4所述的一种检测斑点热群立克次体的试剂 盒， 其特征在于： 所述显色剂 选自Sybrgre enI、 Eva green、 羟基萘酚蓝、 铬黑T中的一种。 6.如权利要求4所述的一种检测斑点热群立克次体的试剂盒， 其特征在于： 所述CDA反 应缓冲液包括Tris ‑HCl、 KCl、 (NH4)2SO4、 MgSO4和Triton X‑100。 7.如权利要求2所述的一种检测斑点热群立克次体的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒 反应体系的组成为， 2‑50mM Tris‑HCl pH8.8 2‑20mM KCl 2‑20mM(NH4)2SO4 2～20mM MgSO4 0.1～0.5％Trito nX‑100 0.2～1M甜菜碱 1～1.6mM  dNTP 5～10U Bst DNA聚合酶 100～150 μmol/L显色剂 0.2～0.4 μM引物R ‑F2 0.2～0.4 μM引物R ‑R2 1～2 μM引物R ‑MF 1～2 μM引物R ‑MR； 反应溶剂为超纯 水。 8.权利要求7所述的试剂盒非疾病诊断目的的检测斑点热群立克次体的方法， 包括以 下步骤： 步骤1， 将待检测核酸样本和试剂盒的反应 体系混合， 制得扩增反应液； 步骤2， 上述制得的扩增反应液， 于60～65℃反应20～80min， 根据显色结果判断样品是 否含有斑点热群立克次体。 9.权利要求1所述的CDA引物组在非疾病诊断目的 的斑点热群立克次体 检测中的应用。 10.权利要求2 ‑7任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的斑点热群立克次体检测中权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114250311 A 2的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114250311 A 3