(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210120778.0 (22)申请日 2022.02.09 (71)申请人 国科宁波生命与健康产业研究院 地址 315016 浙江省宁波市北郊路159号 申请人 中国科学院大学宁波华美医院 (72)发明人 毛瑞　蔡昊　蔡挺　桂峥　 (74)专利代理 机构 上海硕力知识产权代理事务 所(普通合伙) 31251 代理人 王法男 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12R 1/725(2006.01) (54)发明名称 一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、 试剂 盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测白假丝酵母菌的CDA 引物组、 试剂盒及其应用。 所述CDA引物组为针对 白假丝酵母菌的保守区片段扩增的引物组， 为引 物对CA‑F2/CA‑R2、 CA‑LF/CA‑LR和引物对CA ‑MF/ CA‑MR， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID  NO.6所示。 本发明提供的方法或试剂盒无需昂贵 的仪器、 也无需复杂的操作就可完成对白假丝酵 母菌的快速准确检测， 因此， 适用于专业程度不 高的机场、 海关、 口岸、 社区等地的现场快速检 测。 本发明所提供的可视化试剂盒将为现场检测 提供极大便利， 可实现对白假丝酵母菌快速准确 的检测。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 114427005 A 2022.05.03 CN 114427005 A 1.一种非疾病诊断目的的检测白假丝酵母菌的CDA引物组， 其特征在于： 所述CDA引物 组为以下三对引物， 引物对CA ‑F2/CA‑R2， 其中， CA ‑F2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， CA ‑R2的核苷酸序 列如SEQ ID NO.2所示； 引物对CA ‑LF/CA‑LR， 其中， CA ‑LF的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， CA ‑LR的核苷酸序 列如SEQ ID NO.4所示； 引物对CA ‑MF/CA‑MR， 其中， CA ‑MF的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示， CA ‑MR的核苷酸序 列如SEQ ID NO.6所示。 2.一种检测白假丝酵母菌的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括权利要求1所述的 CDA引物组。 3.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒， 其特征在于： 所述CDA引物组 中， 引物CA ‑F2与CA‑R2的浓度均为0.2～ 0.4 μM， 引物 CA‑LF与CA‑LR的浓度均为0.4～1.5 μM， 引物CA‑MF与CA‑MR的浓度均为1～ 2 μM。 4.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒还包 括Bst聚合酶、 CDA反应缓冲液、 超纯 水、 以及显色剂。 5.如权利要求4所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂 盒， 其特征在于： 所述显色剂选自 Sybrgreen I、 Eva green、 羟基萘酚蓝、 铬黑T中的一种。 6.如权利要求4所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒， 其特征在于： 所述CDA反应缓 冲液包括Tris ‑HCl、 KCl、 (NH4)2SO4、 MgSO4和TritonX‑100。 7.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒反应 体系的组成为， 2‑50mM Tris‑HCl pH8.8 2‑20mM KCl 2‑20mM(NH4)2SO4 2～20mM MgSO4 0.1～0.5％Trito nX‑100 0.2～1M甜菜碱 1～1.6mM  dNTP 5～10U Bst DNA聚合酶 100～150 μmol/L显色剂 0.2～0.4 μM引物CA ‑F2 0.2～0.4 μM引物CA ‑R2 0.4～1.5 μM引物CA ‑LF 0.4～1.5 μM引物CA ‑LR 1～2 μM引物CA ‑MF 1～2 μM引物CA ‑MR； 反应溶剂为超纯 水。 8.权利要求7所述的试剂盒的非疾病诊断目的的检测白假丝酵母菌的方法， 包括以下 步骤：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114427005 A 2步骤1， 将待检测核酸样本和试剂盒的反应 体系混合， 制得扩增反应液； 步骤2， 上述制得的扩增反应液， 于60～65℃反应20～80min， 根据显色结果判断样品是 否含有白假丝酵母菌 。 9.权利要求1所述的CDA引物组在非疾病诊断目的 的白假丝酵母菌检测中的应用。 10.权利要求2 ‑7任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的白假丝酵母菌检测中的应 用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114427005 A 3