(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221012575 6.3 (22)申请日 2022.02.10 (71)申请人 浙江省肿瘤医院 地址 310022 浙江省杭州市拱 墅区半山 东 路1号 (72)发明人 徐超　姚庆华　 (74)专利代理 机构 北京权智天下知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11638 专利代理师 高丽红 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不 良状况的试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种结肠癌肿瘤患者菌群检 测诊断营养不良状况的试剂盒， 包括： 菌株的DNA 引 物 序 列 ，所 述 菌 株 分 别 是 ： Atopobium.Vaginae、 Selenomonas  sputigena、 Faecalibacterium  prausnitzii； 还包括 粪便样 本保存试剂、 PCR反应试剂、 PCR产物纯化试剂、 测 序反应试剂； 通过对结肠癌患者粪便采用， DNA提 取、 PCR扩增后， 再由Atopobium.Vaginae、 Selenomonas  sputigena、 Faecalibacterium   prausnitzii  DNA测序引物进行测序后得出样本 中关于三种菌株的DNA序列丰度， 根据三种菌株 丰度与营养评估情况的相关性诊断出结肠癌患 者营养状况； 本发明提供的试剂盒诊断方法可无 创、 准确对结肠癌营养 状况进行诊断评估。 权利要求书2页 说明书4页 附图1页 CN 114592077 A 2022.06.07 CN 114592077 A 1.一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其特征在于， 包括菌株 的DNA引物序列， 所述菌株分别是： Atopobium.Vaginae、 Selenomonas  sputigena、 Faecalibacterium  prausnitzii； 三种菌株的DNA特异性引物序列如下： 1)Atopobium.Va ginae DNA正向引物： 5'‑GGTGAAGCAGTGGAAACACT‑3' Atopobium.Va ginae DNA反向引物： 5'‑ATTCGCTTCTGCTCGCGCA ‑3' 2)Selenomonas sputigena  DNA正向引物： 5'‑AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3' Selenomonas sputigena  DNA反向引物： 5'‑CTCAATATTCTCAAGCTCGGTT‑3' 3)Faecal ibacteriumprausn itzii DNA正向引物： 5'‑CCCGGCATCGGGTAGAG‑3' Faecalibacteriumprausn itzii DNA反向引物： 5'‑GGACGCGAG GCCATCTC‑3'； 所述试剂盒还包括： 粪便样本保存试剂、 PCR反应试剂、 PCR产物纯化试剂、 测序反应试 剂。 2.根据权利要求1所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述粪便样本保存试剂为DNAhelper保护液， 且粪便样本与DNAhelper保护液的 比例为1:2。 3.根据权利要求1所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述PCR反应试剂 包括： 10xPCR反应缓冲液、 25mM  dNTP混合液、 5U/u l Taq DNA聚 合酶、 20uM引物对、 d dH2O。 4.根据权利要求1所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述PCR产物纯化试剂包括： 1U/ul  SAP酶、 10U/ul  ExoI酶、 ddH2O。 5.根据权利要求1所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述测序反应体系包括： 25％BigDye  mix1ul、 3.2uM  DNA测序引物、 125mM  EDTA 溶液、 100％乙醇溶 液、 70％乙醇溶 液、 HIDI溶 液、 ddH2O。 6.根据权利要求5所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述DNA测序引物序列如下： Atopobium.Va ginae DNA测序引物： 5'‑GGTGAAGCAGTGGAAACACT‑3'； Selenomonas sputigena  DNA测序引物： 5'‑AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3'； Faecalibacteriumprausn itzii DNA测序引物： 5'‑CCCGGCATCGGGTAGAG‑3'。 7.根据权利要求1所述一种结肠癌肿瘤患者菌群检测诊断营养不良状况的试剂盒， 其 特征在于， 所述Atopobium.Vaginae在经过测序后其所获得的结果与内参基因相比， 超过 2.98倍即表示患者可能存在中重度营养不良需要干预； Selenomonas  sputigena的结果与权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114592077 A 2内 参 基 因 相 比 ，超 过 2 . 6 6 倍 即 表 示 可 能 存 在 中 重 度 营 养 不 良 ；而 Faecalibacteriumprausnitzii的结果与内参基因相比， 超过1.96倍即表示可能存在中重 度营养不良。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114592077 A 3