(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210124552.8 (22)申请日 2022.02.10 (71)申请人 亚能生物技 术 （深圳） 有限公司 地址 518000 广东省深圳市光明区马田街 道薯田埔社区特发光网大厦401 (72)发明人 曲玲　郭威林　周万军　刘南松　 宋丽思　 (74)专利代理 机构 深圳鼎合诚知识产权代理有 限公司 4 4281 代理人 李小焦　彭家恩 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测异常血红蛋白基因突变的试剂盒 (57)摘要 本申请公开了一种检测人类异常血红蛋白 基因突变的试剂盒。 本申请检测异常血红 蛋白基 因突变的试剂盒包括检测8种异常α ‑珠蛋白基 因点突变的试剂A， 和检测6种异常β ‑珠蛋白基 因点突变的试剂B； 试剂A包括一组α珠蛋白特异 性引物对和八条α珠蛋白突变位点特异性探针； 试剂B包括两组β珠蛋白特异性引物对和五条β 珠蛋白突变位点特异性探针。 本申请检测异常血 红蛋白基因突变的试剂盒， 能同时检测14种异常 血红蛋白基因突变， 检测位点更全面、 效率更高、 准确性高和重复性 好。 权利要求书4页 说明书16页 序列表4页 附图5页 CN 114381515 A 2022.04.22 CN 114381515 A 1.一种检测人类异常血红蛋白基因突变的试剂 盒， 其特征在于： 包括检测8种异常α ‑珠 蛋白基因点 突变的试剂A， 和检测6种异常β ‑珠蛋白基因点 突变的试剂B； 所述试剂A包括一组α珠蛋白特异性引物对和八条α珠蛋白突变位点特异性探针； 所述 一组α 珠蛋 白特异性引物对的上游引物为Seq  ID No.1所示序列， 下游引物为Seq  ID No.2 所示序列， 所述八条α 珠蛋白突变位点特异性探针依序为Seq  ID No.3至Seq  ID No.10所示 序列； 所述试剂B包括两组β 珠蛋白特异性引物对和五条β 珠蛋白突变位点特异性探针； 所述 两组β 珠蛋白特异性引物对中， 其中一组β 珠蛋白特异性引物对的上游引物 为Seq ID No.11 所示序列， 下游引物 为Seq ID No.12所示序列； 另一组β 珠蛋白特异性引物对的上游引物为 Seq ID No.13所示序列， 下游引物为Seq  ID No.14所示序列； 所述五条β 珠蛋白突变位点特 异性探针依序为Seq  ID No.15至Seq ID No.19所示序列； Seq ID No.1： 5’ ‑CGGCACTCTTCTGGTCCCCACAG‑3’； Seq ID No.2： 5’ ‑CCACTCAGACT TTATTCAAAGAC‑3’； Seq ID No.3： 5’ ‑CCGACCTTACGCCAGGCGGCC‑3’； Seq ID No.4： 5’ ‑GCCTCACCTCTCCAGGGCCTC‑3’； Seq ID No.5： 5’ ‑AAGGACAGGAACATCCTGC‑3’； Seq ID No.6： 5’ ‑GGCATGCCNNNNNNNNNCACGTGCGC ‑3’； Seq ID No.7： 5’ ‑TTGGGCATNNNNNNNNNGTCCACGTGCGC ‑3’； Seq ID No.8： 5’ ‑CACCCGAAGCTTGTGCGC‑3’； Seq ID No.9： 5’ ‑GGAGGCGTGCAC CGCAGGG‑3’； Seq ID No.10： 5’ ‑GGAGGTCAGCACG GCGCTCACA ‑3’； Seq ID No.11： 5’ ‑GGAGCAGGGAGGGCAGGAGCCAGGG‑3’； Seq ID No.12： 5’ ‑AGGGTCCCATAGACTCAC CCT‑3’； Seq ID No.13： 5’ ‑GGCCCTTTTGCTAATCATGTT‑3’； Seq ID No.14： 5’ ‑AAGGCCCTTCATAATATCCCC‑3’； Seq ID No.15： 5’ ‑AACGTGGATGAAGTTGGTGGT‑3’； Seq ID No.16： 5’ ‑CTGTTATGGACAACCCNNNNNNNNNGTGAAG‑3’； Seq ID No.17： 5’ ‑CTGTTATNNNNNNNNNACCCTAAGGTGA‑3’； Seq ID No.18： 5’ ‑ACGTGGATCCTCAGAACTTCA‑3’； Seq ID No.19： 5’ ‑TGGGCCAGCTCACAGAC C‑3’； 其中， Seq  ID No.6、 Seq ID No.7、 Seq  ID No.16和Seq  ID No.17所示序列的探针为拱 桥探针， 这四个探针中的 “NNNNNNNNN ”表示与靶序列不匹配的长度为5 ‑15bp的序列， 使得这 四个探针与靶标结合后呈拱桥形状； 八条α 珠蛋白突变位点特异 性探针和五条β 珠蛋白突变 位点特异 性探针的5 ’端都标记有相同或不同的荧光基团， 3 ’端都标记有相同或不同的荧光 淬灭基团。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于： 还包括检测内参基因β ‑actin的内参特 异性引物对和内参特异 性探针， 所述内参特异性引物对的上游引物 为Seq ID No.20所示序 列， 下游引物为Seq  ID No.21所示序列， 内参特异性探针为Seq  ID No.22所示序列； Seq ID No.20： 5’ ‑GCTCCATCCTGGCCTCGC‑3’；权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114381515 A 2Seq ID No.21： 5’ ‑CGTCCACCGCAAATGCTTCT‑3’； Seq ID No.22： 5’ ‑CGTCAACACCCCAGCCA‑3’。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒， 其特征在于： Seq  ID No.3所示序列的探针的5 ’端 标记有荧光基团CY5， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ3； Seq  ID No.4所示序列的探针的5 ’端标 记有荧光基团CY5， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ3； Seq  ID No.5所示序列的探针的5 ’端标记 有荧光基团HEX， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.6所示序列的探针的5 ’端标记有 荧光基团FAM， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.7所示序列的探针的5 ’端标记有荧 光基团FAM， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.8所示序列的探针的5 ’端标记有荧光 基团ROX， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BQ2； Seq  ID No.9所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团HEX， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.10所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团ROX， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ2； Seq  ID No.15所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团FAM， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.16所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团HEX， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.17所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团HEX， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ1； Seq  ID No.18所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团ROX， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ2； Seq  ID No.19所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团CY5， 3’端标记有荧光淬灭基团BQ3； Seq  ID No.22所示序列的探针的5 ’端标记有荧光基 团FAM， 3’端标记有荧 光淬灭基团BQ1。 4.根据权利要求1 ‑3任一项所述的试剂 盒在制备异常血红蛋白基因突变检测的试剂中 的应用。 5.一种检测人类异常血红蛋白基因突变的试剂 盒， 其特征在于： 包括反应液I和反应液 II； 所述反应液I包括一组α 珠蛋白特异性引物对、 八条α 珠蛋白突变位点特异性探针、 一组 内参特异性引物对、 一条内参特异性探针、 dNTPs和PCR反应缓冲液； 所述一组α珠蛋白特异性引物对的上游引物为Seq  ID No.1所示序列， 下游引物为Seq   ID No.2所示序列， 所述八条α珠蛋白突变位点特异性探针依序为Seq  ID No.3至Seq  ID  No.10所示序列， 一组 内参特异性引物对的上游引物 为Seq ID No.20所示序列， 下游引物为 Seq ID No.21所示序列， 一条内参特异性探针为Seq  ID No.22所示序列； 所述反应液II包括两组β珠蛋白特异性引物对、 五条β珠蛋白突变位点特异性探针、 dNTPs和PCR反应缓冲液； 所述两组β 珠蛋白特异性引物对中， 其中一组β 珠蛋白特异性引物对的上游引物为Seq   ID No.11所示序列， 下游引物为Seq  ID No.12所示序列； 另一组β 珠蛋白特异性引物对的上 游引物为Seq  ID No.13所示序列， 下游引物 为Seq ID No.14所示序列； 所述五条β 珠蛋白突 变位点特异性探针依序为Seq  ID No.15至Seq ID No.19所示序列； Seq ID No.1： 5’ ‑CGGCACTCTTCTG