(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210124739.8 (22)申请日 2022.02.10 (71)申请人 中国科学技术大学 地址 230026 安徽省合肥市包河区金寨路 96号 (72)发明人 仓春蕾　李豪　魏亚男　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 张柳 (51)Int.Cl. C12N 15/85(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12Q 1/37(2006.01)G01N 21/64(2006.01) (54)发明名称 蛋白探针以及其在检测BAC E1活性中的应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域， 尤其涉及蛋白探 针以及其在检测BACE1活性中的应用。 本发明提 供了表达载体， 上述表达载体包括编码如下蛋白 片段的基因， 上述蛋白片段包括： mCherry ‑N片 段， mCherry‑C片段， VAMP7， BACE1识别多肽。 本发 明提供了一种直观， 动态， 简便， 可操作性强， 可 在生理条件下实施， 可用于检测活细胞中BACE1 活性的荧 光蛋白探 针。 权利要求书2页 说明书9页 序列表4页 附图4页 CN 114480494 A 2022.05.13 CN 114480494 A 1.表达载体， 其特征在于， 所述表达载体包括编码如下蛋白片段的核酸， 所述蛋白片段 包括： mCherry‑N片段； mCherry‑C片段； VAMP7； BACE1识别多肽。 2.如权利要求1所述的表达载体， 其特 征在于： 编码所述mC herry‑N片段的核酸具有： (1)、 如SEQ  ID NO:13所示的核苷酸序列； 或 (2)、 与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质， 但因遗传密码的简并性而与(1)所示的 核苷酸序列不同的核苷酸序列； 或 (3)、 与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的 核苷酸序列， 且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列； 和/或 编码所述mC herry‑C片段的核酸具有： (4)、 如SEQ  ID NO:14所示的核苷酸序列； 或 (5)、 与(4)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质， 但因遗传密码的简并性而与(4)所示的 核苷酸序列不同的核苷酸序列； 或 (6)、 与(4)或(5)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的 核苷酸序列， 且与(4)或(5)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列； 和/或 编码所述V AMP7的核酸具有： (7)、 如SEQ  ID NO:15所示的核苷酸序列； 或 (8)、 与(7)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质， 但因遗传密码的简并性而与(7)所示的 核苷酸序列不同的核苷酸序列； 或 (9)、 与(7)或(8)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的 核苷酸序列， 且与(7)或(8)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列； 和/或 所述BACE1识别多肽具有： (10)、 如SEQ  ID NO:10、 如SEQ  ID NO:11和/或如SEQ  ID NO:12所示的氨基酸序列； 或 (11)、 如(10)所示的氨基酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个氨基获得的氨基酸序 列， 且与(10)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列； 或 (12)、 与(10)或(1 1)所示的氨基酸序列至少有80％同一 性的氨基酸序列； 编码所述BAC E1识别多肽的核酸具有： (13)、 如SEQ  ID NO:16、 SEQ  ID NO:17或SEQ  ID NO:18所示的核苷酸序列； 或 (14)、 与(13)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质， 但因遗传密码的简并性而与(13)所 示的核苷酸序列不同的核苷酸序列； 或 (15)、 与(13)或(14)所示的核苷酸序列经取代、 缺失或添加一个或多个核苷酸序列获 得的核苷酸序列， 且与(13)或(14)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列。 3.引物及其组合， 其特征在于， 以如权利要求1或如权利要求2所述表达载体为扩增的 目的片段。 4.宿主细胞， 其特征在于， 转化和/或转染如权利要求1和/或如权利要求2所述的表达权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480494 A 2载体。 5.蛋白探针， 其特征在于， 经如权利要求1和/或如权利要求2所述的表达载体和/或如 权利要求 4所述的宿主细胞直接或间接制得。 6.检测产品， 其特 征在于， 包括如权利要求5所述的蛋白探针以及可接受的助剂。 7.如权利要求6所述的检测产品， 其特 征在于， 所述检测产品不包括蛋白裂解液。 8.如权利要求1和/或如权利要求2所述的表达载体、 如权利要求4所述的宿主细胞、 如 权利要求5所述的蛋白探针和/或如权利要求6和/或如权利要求7所述的检测产品在制备检 测BACE1活性的试剂盒中的应用。 9.如权利要求1和/或如权利要求2所述的表达载体、 如权利要求4所述的宿主细胞、 如 权利要求5所述的蛋白探针和/或如权利要求6和/或如权利要求7所述的检测产品在制备检 测和/或诊断 阿尔兹海默症的试剂盒中的应用。 10.如权利要求1和/或如权利要求2所述的表达载体、 如权利要求4所述的宿主细胞、 如 权利要求5所述的蛋白探针和/或如权利要求6和/或如权利要求7所述的检测产品在筛选预 防和/或治疗阿尔兹海默症的药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480494 A 3