(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221012793 3.1 (22)申请日 2022.02.11 (71)申请人 中国科学院化学研究所 地址 100190 北京市海淀区中关村北一 街2 号 申请人 中国人民解 放军总医院第六医学中 心 (72)发明人 王树　申奇　刘昱圻　刘礼兵　 陈韵岱　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于共轭聚合物的个性化高血压用药相关 的基因检测试剂与应用 (57)摘要 本发明公开了基于共轭聚合物的个性化高 血压用药相关的基因检测方法与应用。 本发明提 供序列1至序列24所述的PCR引物对和特异性单 碱基延伸引物， 可用于鉴定或辅助鉴定ABCB1 (S893A)基因、 EDN1(G5665T)基因、 CYP2C9*3基 因、 CYP2C9*13基因、 ADRB3(W64R)基因、 SCNN1G(T >A)基因、 CYP3A5*3基因和CACNA1C的基因多态 性。 本发明提供的引物组合物及测定方法可快 速、 精准的获得检测的结果。 上述基因位点多态 性检测的结果对病人具有一定的辅助诊断和指 导用药的意 义。 权利要求书2页 说明书11页 序列表4页 附图4页 CN 114350792 A 2022.04.15 CN 114350792 A 1.鉴定或辅助鉴定待测样品SNP的多态性或基因型的试剂 或试剂盒， 其特征在于： 所述 SNP选自rs2032582、 rs5370、 rs1057910、 rs72558187、 rs4994、 rs5729、 rs776746和 rs2283274这8种SNP中的全部或部分； 所述试剂或试剂盒包括引物组合物和阳离子共轭聚合物， 所述引物组合物包括PCR引 物对， 所述PCR引物对为PCR引物对ABCB1(S89 3A)‑FR、 PCR引物对EDN1(G5665T) ‑FR、 PCR引物 对CYP2C9*3 ‑FR、 PCR引物对CYP2C9 *13‑FR、 PCR引物对ADRB3(W64R) ‑FR、 PCR引物对SCNN1G(T >A)‑FR、 PCR引物对C YP3A5*3‑FR和PCR引物对CACNA1C ‑FR； 所述PCR引物对ABCB1( S893A)‑FR为所述rs2032582的特异PCR引物对， 由引物ABCB1 (S893A)‑Fw和引物ABCB1(S893A) ‑Rw组成， 引物ABCB1(S893A) ‑Fw是SEQ ID No.1所示的单 链DNA， 引物 ABCB1(S893A)‑Rw是SEQ ID No.2所示的单链DNA； 所述PCR引物对EDN1(G5665T) ‑FR为所述rs5370的特异PCR引物对， 由引物EDN1 (G5665T) ‑Fw和引物EDN1(G5665T) ‑Rw组成， 引物EDN1(G5665T) ‑Fw是SEQ ID No.4所示的单 链DNA， 引物EDN1(G5 665T)‑Rw是SEQ ID No.5所示的单链DNA； 所述PCR引物对CYP2C9*3 ‑FR为所述rs1057910的特异PCR引物对， 由引物CYP2C9*3 ‑Fw 和引物CYP2 C9*3‑Rw组成， 引物 CYP2C9*3‑Fw是SEQ ID No.7所示的单链DNA， 引物CYP2 C9*3‑ Rw是SEQ ID No.8所示的单链DNA； 所述PCR引物对CYP2C9*13 ‑FR为所述rs72558187的特异PCR引物对， 由引物CYP2C9*13 ‑ Fw和引物CYP2C9*13 ‑Rw组成， 引物CYP2C9*13 ‑Fw是SEQ ID No.10所示的单链DNA， 引物 CYP2C9*13 ‑Rw是SEQ ID No.11所示的单链DNA； 所述PCR引物对ADRB3(W64R) ‑FR为所述rs4994的特异PCR引物对， 由引物ADRB3(W64R) ‑ Fw和引物ADRB3(W64R) ‑Rw组成， 引物ADRB3(W64R) ‑Fw是SEQ ID No.13所示的单链DNA， 引物 ADRB3(W64R) ‑Rw是SEQ ID No.14所示的单链DNA； 所述PCR引物对SCNN1G(T>A) ‑FR为rs5729基因的特异PCR引物对， 由引物SCNN1G(T>A) ‑ Fw和引物SCNN1G(T>A) ‑Rw组成， 引物SCNN1G(T>A) ‑Fw是SEQ ID No.16所示的单链DNA， 引物 SCNN1G(T>A) ‑Rw是SEQ ID No.17所示的单链DNA； 所述PCR引物对CYP3A5*3 ‑FR为所述r s776746的特异PCR引物对， 由引物CYP3A5*3 ‑Fw和 引物CYP3A5*3 ‑Rw组成， 引物CYP3A5*3 ‑Fw是SEQ ID No.19所示的单链DNA， 引物CYP3A5*3 ‑ Rw是SEQ ID No.20所示的单链DNA； 所述PCR引物对CACNA1C ‑FR为所述rs2283274基因的特异PCR引物对， 由引物CACNA1C ‑ Fw和引物 CACNA1C‑Rw组成， 引物 CACNA1C‑Fw是SEQ ID No.22所示的单链DNA， 引物CA CNA1C‑ Rw是SEQ ID No.23所示的单链DNA。 2.如权利要求1所述的试剂 或试剂盒， 其特征在于： 所述引物组合物还包括单碱基延伸 引物， 所述单碱基延伸引物为ABCB1(S893A) ‑S、 EDN1(G5665T) ‑S、 CYP2C9*3 ‑S、 CYP2C9*13 ‑ S、 ADRB3(W64R) ‑S、 SCNN1G(T>A) ‑S、 CYP3A5*3‑S和CACNA1C ‑S中的8种以下； 所述ABCB1(S893A) ‑S是SEQ ID No.3所示的单链DNA， 所述EDN1(G5665T) ‑S是SEQ ID  No.6所示的单链DNA， 所述CYP2C9*3 ‑S是SEQ ID No.9所示的单链DNA， 所述CYP2C9*13 ‑S是 SEQ ID No.12所示 的单链DNA， 所述ADRB3(W64R) ‑S是SEQ ID No.15所示 的单链DNA， 所述 SCNN1G(T>A) ‑S是SEQ ID No.18所示的单链DNA， 所述CYP3A 5*3‑S是SEQ ID No.21所示的单 链DNA， 所述CACNA1C ‑S是SEQ ID No.24所示的单链DNA。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114350792 A 23.如权利要求2所述的试剂 或试剂盒， 其特征在于： 所述引物组合物还包括单碱基延伸 引物对应的荧光标记的dNTP， 所述dNTP为所述ABCB1(S893A) ‑S对应的荧光标记的dNTP为 dATP； 所述EDN1(G5665T) ‑S对应的荧光标记的dNTP为dCTP； 所述CYP2C9*3 ‑S对应的荧光标 记的dNTP为dUTP； 所述CYP2C9*13 ‑S对应的荧光标记的dNTP为dUTP； 所述ADRB3(W64R) ‑S对 应的荧光标记的dNTP为dGTP； 所述SCNN1G(T>A)对应的荧光标记的dNTP为dGTP； 所述 CYP3A5*3‑S对应的荧 光标记的dNTP为dU TP； 所述CACNA1C ‑S对应的荧 光标记的dNTP为dCTP。 4.如权利要求2或3所述的试剂或试剂盒， 其特征在于： 所述单碱基延伸引物对应的荧 光标记为 荧光素或Cy3 。 5.鉴定或辅助鉴定待测样品SNP的多态性或基因型多态性的引物 组合物， 其特征在于： 所述引物组合物含有权利要求1所述的PCR引物对。 6.如权利要求5所述的引物组合物， 其特征在于： 所述引物组合物还包括权利要求2所 述的单碱基延伸引物和/或权利要求3所述的单碱基延伸引物对应的荧 光标记的dNTP。 7.权利要求1 ‑4中任一项所述的试剂 或试剂盒或权利要求5或6所述的引物 组合物在鉴 定或辅助鉴待测样品SNP的多态性或基因型多态性中的应用。 8.鉴定或辅助鉴定待测样品SNP的多态性或基因型多态性的方法， 其特征在于： 所述 SNP选自rs2032582、 rs5370、 rs1057910、 rs72558187、 rs4994、 rs5729、 rs776746和 rs2283274这8种SNP中的全部或部分； 所述方法包括如下步骤： 步骤1)、 以待测样品的基因组DNA为模板DNA， 分别加入权利要求1中所述的PCR引 物对 进行PCR扩增， 得到扩增产物； 步骤2)用权利要求2中所述的单碱基延伸引物和权利要求3中所述的dNTP与步骤1)获 得的扩增产物进行 单碱基延伸反应， 得到荧 光标记的PCR产物； 步骤3)得到的荧光标记PCR产物与阳离子共轭聚合物反应， 得到荧光共振能量转移比 值。 9.如权利要求8所述的方法， 其特征在于： 步骤1)中PCR扩增反应分为4个PCR扩增反应 体系进行， 同一个PCR扩增反应体系中两个引物组合物中的单碱基延伸引物的下游核苷酸 碱基种类不同； 步骤2)中所述单碱基延伸反应分为4个反应体系， 反应体系中分别加入与步骤1)的扩 增产物对应的单碱基延伸引物与dNTP。 10.根据权利要